[發明專利]一種人白細胞介素-29的重組變異體及其制備方法

在審

• 申請號: 201410756203.3
• 申請日: 2014-12-12
• 公開（公告）號: CN104402988A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 陳偉;陸源;李利云;鄔敏辰;吳靜
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: C07K14/54
• 分類號: C07K14/54;C12N15/24;C12N15/81;C12N1/19;C12P21/02;C12R1/84
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1.本發明中的重組人白細胞介素-29變異體(rhIL-29L)特征在于表達的IL-29肽鏈中第33位氨基酸賴氨酸(Lys)經人工定點突變為精氨酸(Arg)，對應于序列表中的SEQ?ID?NO：1。

2.本發明中經人工定點突變改造的人白細胞介素-29變異體的編碼基因序列，其特征在于該序列中第98位堿基由A(腺嘌呤)突變為G(鳥嘌呤)，由該堿基組成的三聯體密碼由AAG突變為AGG，對應于序列表中的SEQ?ID?NO：2。

3.本發明中表達重組人白細胞介素-29變異體的重組真核表達載體，其特征在于所述的重組真核表達載體中插入了權利要求2所述的人白細胞介素-29變異體的編碼基因。

4.本發明中的重組畢赤酵母工程菌，其特征在于所述的重組畢赤酵母的染色體中整合有權利要求2所述的人白細胞介素-29變異體的編碼基因，并且分泌表達重組人白細胞介素29變異體至培養液中。

5.一種制備重組人白細胞介素-29變異體的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)用適當的培養液，培養權利要求4所述的重組畢赤酵母工程菌；

(2)在培養液中添加適當的誘導劑，誘導重組畢赤酵母工程菌分泌表達重組人白細胞介素-29變異體；

(3)從培養液中分離純化出重組畢赤酵母分泌表達的重組人白細胞介素-29變異體。

6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟(1)所用的培養液為BMGY培養液和BMMY培養液；步驟(2)所用的誘導劑為甲醇，添加甲醇的終濃度為培養液體積的1.5％；步驟(3)所用的分離純化方法為先用強陽離子型離子交換層析分離培養液中的重組人白細胞介素-29變異體，再用凝膠過濾層析得到純化的重組人白細胞介素-29變異體。