[發明專利]一種基因工程菌及其構建方法和在生產木糖醇中的應用在審
| 申請號： | 201410750635.3 | 申請日： | 2014-12-09 |
| 公開（公告）號： | CN104593308A | 公開（公告）日： | 2015-05-06 |
| 發明（設計）人： | 吳綿斌;蘇卜利;張哲;林建平;楊立榮 | 申請（專利權）人： | 浙江大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 杭州天勤知識產權代理有限公司 33224 | 代理人： | 胡紅娟 |
| 地址： | 310027 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 基因工程 及其 構建 方法 生產 木糖醇 中的 應用 | ||
1.一種基因工程菌，包括大腸桿菌和轉入大腸桿菌的表達載體，其特征在于，所述表達載體的啟動子下游插入有木糖還原酶基因，所述木糖還原酶基因的堿基序列如SEQ?ID?No.4所示。
2.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述啟動子為Trc啟動子，所述木糖還原酶基因的5’端帶有核糖體結合位點，所述核糖體結合位點的堿基序列為：
5’-AGAAGGAGATATACAT-3’。
3.如權利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，所述表達載體為pTrc99a。
4.如權利要求1～3任一所述的基因工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌中，葡萄糖磷酸轉移酶基因被抑制或敲除。
5.如權利要求1～3任一所述的基因工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌中，木糖異構酶基因和木酮糖激酶基因中至少一者被抑制或敲除。
6.如權利要求1～3任一所述的基因工程菌，其特征在于，所述大腸桿菌中，果糖磷酸轉移酶基因被抑制或敲除。
7.如權利要求1～6任一所述基因工程菌的構建方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)分別構建葡萄糖磷酸轉移酶基因敲除載體、木糖異構酶基因敲除載體、木酮糖激酶基因敲除載體、果糖磷酸轉移酶基因敲除載體，并取四種敲除載體中至少一種轉化大腸桿菌感受態細胞，獲得敲除了葡萄糖磷酸轉移酶基因、木糖異構酶基因、木酮糖激酶基因和果糖磷酸轉移酶基因中至少一者的大腸桿菌；
(2)將5’端帶核糖體結合位點的木糖還原酶基因連接于pTrc99a的Trc啟動子下游，獲得表達載體；
(3)將所述表達載體轉化步驟(1)獲得的大腸桿菌，獲得所述基因工程菌。
8.如權利要求1～6任一所述基因工程菌在生產木糖醇中的應用。
9.如權利要求8所述的應用，其特征在于，包括：
將所述基因工程菌接種至培養液中培養至OD600為0.6～1.0，加入誘導劑進行誘導表達，完成后從培養液中分離純化獲得木糖醇。
10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，于26～30℃下誘導表達40～120h。
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