[發明專利]一種通過引入聚-β-羥基丁酸酯代謝途徑提高鈍齒棒桿菌L-精氨酸產量的方法在審
| 申請號： | 201410748914.6 | 申請日： | 2014-12-09 |
| 公開（公告）號： | CN104531747A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發明（設計）人： | 饒志明;秦敬儒;徐美娟;張顯;楊套偉 | 申請（專利權）人： | 江南大學 |
| 主分類號： | C12N15/77 | 分類號： | C12N15/77;C12N15/66;C12N1/21;C12P13/10;C12R1/15 |
| 代理公司： | 無 | 代理人： | 無 |
| 地址： | 214122 江蘇*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 通過 引入 羥基 丁酸 代謝 途徑 提高 鈍齒棒 桿菌 精氨酸 產量 方法 | ||
1.一種高產L-精氨酸的重組鈍齒棒桿菌(Corynebacterium?crenatum)，其特征在于：將SEQ?ID?NO：1所示的Ralstonia?eutropha?H16的聚-β-羥基丁酸(PHB)合成操縱子基因phbCAB從pBHR68上酶切下來，連接到穿梭表達載體pDXW-10，構建成為重組表達質粒pDXW-10-phbCAB并轉化至鈍齒棒桿菌C.crenatum?SYPA中，經發酵罐實驗驗證,重組鈍齒棒桿菌提高了生產L-精氨酸的能力。
2.利用權利要求1構建的重組鈍齒棒桿菌C.crenatum?SYPA/pDXW-10-phbCAB，優化其5-L發酵罐發酵生產L-精氨酸的條件，其發酵條件為：pH為7.0，溫度為30℃，轉速為600rpm；培養基配方為：葡萄糖200g/l，硫酸銨20g/l，酵母提取物12g/l，七水合硫酸鎂0.5g/l，氯化鉀1g/l，磷酸二氫鉀1.5g/l，七水合硫酸亞鐵0.02g/l，一水合硫酸錳0.02g/l。
3.利用權利要求1構建的重組枯鈍齒棒桿菌C.crenatum?SYPA/pDXW-10-phbCAB，在權利要求2發酵條件下進行發酵生產L-精氨酸，其特征是：菌株C.crenatum?SYPA/pDXW-10-phbCAB接種于含卡那霉素10mL?LBG培養基中，30℃振蕩培養24h后，全部轉接于總體積為150ml的種子培養基中(該種子培養基的配方為：葡萄糖50g/L，硫酸銨20g/L，酵母提取物12g/l，七水合硫酸鎂0.5g/l，磷酸二氫鉀1.5g/l，去離子水配置，pH?7.0)，30℃振蕩培養24h后，轉接于5-L反應器中，培養至96h，L-精氨酸的產量達到43.21g/L，相比于對照菌株C.crenatum?SYPA(36.68g/l)，產量提高了17.8％。
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