[發(fā)明專利]一種片段縮合制備曲普瑞林的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410743707.1 | 申請日： | 2014-12-08 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104387454B | 公開（公告）日： | 2017-07-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 彭雅麗;常民;王銳;方泉;薛宏祥;賀真 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘭州大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C07K7/23 | 分類號(hào)： | C07K7/23;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 730000 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 片段 縮合 制備 曲普瑞林 方法 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及制藥領(lǐng)域，具體涉及一種片段縮合制備曲普瑞林的方法。
背景技術(shù)
曲普瑞林，英文名：Triptorelin，商品名：達(dá)菲林、達(dá)必佳，肽序列為：H-Pyr-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，分子式：C64H82N18O13，分子量：1310.63。
曲普瑞林作為一種促性腺激素釋放激素類似物，主要作用于垂體前葉，臨床用于治療相關(guān)性激素病癥，包括晚期前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位、子宮肌瘤、體外受精、中樞性性早熟癥等。
目前曲普瑞林的制備方法主要以逐個(gè)縮合為主。例如專利US4010125使用Benzhydryl amine樹脂為起始原料，以Boc保護(hù)的氨基酸為單體，專利CN200710044419.7和CN201310013712.2以及CN201310014882.2，均以Rink Amide MBHA樹脂或者RinkAmide AM樹脂為起始原料，以Fmoc保護(hù)的氨基酸為單體，依次逐個(gè)接上氨基酸，裂解獲得曲普瑞林粗品，最后HPLC進(jìn)行分離純化，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。
以上方法有如下一些問題：a)曲普瑞林序列中存在Arg-Pro，在常規(guī)條件下用固相方法縮合需要過量氨基酸，且縮合效率低，容易出現(xiàn)缺陷肽。這是由于氨基酸自身結(jié)構(gòu)導(dǎo)致的立體位阻使得縮合反應(yīng)極為困難。b)使用Rink樹脂羧基端氨基酸取代值不能太高，合成不經(jīng)濟(jì)；并且相對(duì)于2-氯-三苯甲基氯樹脂價(jià)格不菲。c)全液相合成時(shí)，需要良好的后處理技術(shù)。
所以本領(lǐng)域技術(shù)人員仍然期待以高收率、低成本獲得具有良好品質(zhì)的產(chǎn)品。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對(duì)現(xiàn)有制備方法收率低，而且產(chǎn)品純化困難，不易得到高純度的曲普瑞林的問題，提供一種固液相結(jié)合片段縮合的方法制備曲普瑞林，提高產(chǎn)率和純度；由于采用2-氯-三苯甲基氯樹脂使得成本降低，利于大規(guī)模生產(chǎn)。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下：
方案一：
一種片段縮合制備曲普瑞林的方法，固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列；液相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列并脫除其氨基端保護(hù)基；液相中，脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與第一肽片段序列縮合，得到全保護(hù)的曲普瑞林；脫去全保護(hù)的曲普瑞林的側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗肽，高效液相純化換鹽得到醋酸曲普瑞林；
其中，
所述的第一肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1～7位氨基酸，
所述的第二肽片段序列為曲普瑞林序列中的第8～10位氨基酸。
上述片段縮合制備曲普瑞林的方法優(yōu)選包括以下步驟：
(1)固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列樹脂，
所述的全保護(hù)第一肽片段序列為：
Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH，
將全保護(hù)第一肽片段序列從固相載體上裂解；
(2)液相合成曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列，
所述的全保護(hù)的第二肽片段序列為：
Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-NH2；
脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基；
(3)液相中將步驟(2)得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與步驟(1)得到的全保護(hù)的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林；
(4)將全保護(hù)曲普瑞林裂解脫去側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗品；
(5)曲普瑞林粗品經(jīng)純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林。
步驟(1)中，全保護(hù)的第一肽片段序列樹脂是由氨基酸依次偶聯(lián)在固相載體上獲得；其中，所用的固相載體為酸敏感樹脂，優(yōu)選為2-氯-三苯甲基氯樹脂。
固相制備曲普瑞林全保護(hù)第一肽片段序列樹脂的過程中，所使用的氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量為20％的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1％的DBU的DMF溶液；優(yōu)選體積百分含量為20％哌啶的DMF溶液。
所用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合、或者DIC與HOBt按摩爾比1:1的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合。優(yōu)選HBTU與HOBt與DIEA按摩爾比1:1:2的組合；待偶聯(lián)的氨基酸與HOBt的摩爾比是1:1。
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