[發(fā)明專利]一種片段縮合制備曲普瑞林的方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410743707.1 | 申請日： | 2014-12-08 |
| 公開（公告）號： | CN104387454B | 公開（公告）日： | 2017-07-21 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 彭雅麗;常民;王銳;方泉;薛宏祥;賀真 | 申請（專利權(quán)）人： | 蘭州大學(xué) |
| 主分類號： | C07K7/23 | 分類號： | C07K7/23;C07K1/20;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02 |
| 代理公司： | 南京蘇高專利商標(biāo)事務(wù)所(普通合伙)32204 | 代理人： | 肖明芳 |
| 地址： | 730000 *** | 國省代碼： | 甘肅;62 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 片段 縮合 制備 曲普瑞林 方法 | ||
1.一種片段縮合制備醋酸曲普瑞林的方法，其特征在于，固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列；液相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列并脫除其氨基端保護(hù)基；液相中，脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與第一肽片段序列縮合，得到全保護(hù)的曲普瑞林；脫去全保護(hù)的曲普瑞林的側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗肽，高效液相純化換鹽得到醋酸曲普瑞林；
其中，
所述的第一肽片段序列為曲普瑞林序列中的第1～7位氨基酸，
所述的第二肽片段序列為曲普瑞林序列中的第8～10位氨基酸；
它包括以下步驟：
(1)固相制備曲普瑞林的全保護(hù)的第一肽片段序列樹脂，
所述的全保護(hù)第一肽片段序列為：
Pyr-His(Trt)-Trp(Boc)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-D-Trp(Boc)-Leu-OH，
將全保護(hù)第一肽片段序列從固相載體上裂解；
(2)液相合成曲普瑞林的全保護(hù)的第二肽片段序列，
所述的全保護(hù)的第二肽片段序列為：
Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-NH2；
脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基；
(3)液相中將步驟(2)得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與步驟(1)得到的全保護(hù)的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林；
(4)將全保護(hù)曲普瑞林裂解脫去側(cè)鏈保護(hù)基得到曲普瑞林粗品；
(5)曲普瑞林粗品經(jīng)純化轉(zhuǎn)鹽得到醋酸曲普瑞林。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備醋酸曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟(1)中，全保護(hù)的第一肽片段序列樹脂是由氨基酸依次偶聯(lián)在固相載體上獲得；其中，所用的固相載體為酸敏感樹脂；
固相制備曲普瑞林全保護(hù)第一肽片段序列樹脂的過程中，所使用的氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量為20％的哌啶的DMF溶液、或者體積百分含量為1％的DBU的DMF溶液；
所用的偶聯(lián)劑為HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；
使用的裂解劑為體積百分含量為0.5～1％的TFA的DCM溶液、體積百分含量為20％的TFE的DCM溶液、或者TFE與AcOH與DCM按照體積比1∶2∶7的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備醋酸曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟(2)中，液相合成全保護(hù)的第二肽片段序列的方法是，首先Fmoc-Pro-OH與H-Gly-NH2反應(yīng)得到Fmoc-Pro-Gly-NH2，脫去Fmoc保護(hù)后與Fmoc-Arg(Pbf)-OH反應(yīng)得到Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-NH2；
所述脫除全保護(hù)的第二肽片段序列的氨基端保護(hù)基也就是脫去Fmoc-Arg(Pbf)-Pro-Gly-NH2的Fmoc保護(hù)，得到H-Arg(Pbf)-Pro-Gly-NH2；
氨基脫保護(hù)試劑為體積百分含量16％的哌啶的DMF溶液，或者體積百分含量為1％的DBU的DMF溶液，或者體積百分含量為50％的二乙胺的DCM溶液；縮合反應(yīng)使用的縮合劑為HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者EDC與HOBt的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；縮合反應(yīng)使用的反應(yīng)溶劑為THF、DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一種或幾種的組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的片段縮合制備醋酸曲普瑞林的方法，其特征在于，步驟(3)中，將步驟(2)得到的脫除了氨基端保護(hù)基的全保護(hù)的第二肽片段序列與步驟(1)得到的全保護(hù)的第一肽片段序列縮合得到全保護(hù)曲普瑞林過程中，使用的縮合劑為HBTU與HOBt與DIEA的組合、或者HBTU與HOAt與DIEA的組合、或者EDC與HOBt的組合、或者DIC與HOBt的組合、或者PyBOP與HOBt與DIEA的組合；縮合反應(yīng)的溶劑為THF、DMF、DCM、NMP和DMSO中的任意一種或幾種的組合。
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