[發明專利]一種O抗原糖鏈延長的甲型副傷寒沙門氏菌及其應用有效
| 申請號： | 201410743690.X | 申請日： | 2014-12-08 |
| 公開（公告）號： | CN105734001B | 公開（公告）日： | 2020-04-07 |
| 發明（設計）人： | 吳軍;孫鵬;劉波;唱韶紅;鞏新;王恒樑;朱力;潘超;馮爾玲 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/74;C12P21/00;A61K39/112;A61P31/04;C12R1/42 |
| 代理公司： | 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245 | 代理人： | 關暢;陳曉慶 |
| 地址： | 100071*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 抗原 延長 副傷寒 沙門氏菌 及其 應用 | ||
1.一種重組菌，是將鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶基因cldLT2導入O抗原鏈長控制酶基因cld敲除的甲型副傷寒沙門氏菌中得到的；
所述鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶CldLT2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；
所述O抗原鏈長控制酶基因cld的核酸序列如GenBank上編號為CP000026的第887812至888789位所示。
2.根據權利要求1所述的重組菌，其特征在于，
所述鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶CldLT2的編碼基因序列如SEQ ID No.1所示。
3.根據權利要求1或2所述的重組菌，其特征在于，所述O抗原鏈長控制酶基因cld敲除的甲型副傷寒沙門氏菌的獲得方法包括如下步驟：
（1）制備線性打靶DNA片段1，其核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，其中含有cat基因；
（2）將pKD46質粒轉化至Salmonella.paratyphi菌中，得到的重組菌記作S. paratyphi/pKD46；
（3）誘導所述S. paratyphi /pKD46菌株中Red重組系統表達，再將所述線性打靶DNA片段1轉化至所述S. paratyphi/pKD46菌株中，所述線性打靶DNA片段1替換所述S.paratyphi/pKD46菌株中的cld基因，得到的重組菌記作S. paratyphicld::cat/pKD46；
（4）去除S. paratyphi cld::cat/pKD46菌株中的pKD46質粒，得到的重組菌記作S.paratyphicld::cat；
所述S. paratyph cld::cat是將cld基因序列替換成cat基因序列的S. paratyphi；
（5）將質粒pCP20轉化至S. paratyphicld::cat中，去除cat基因，得到的重組菌記作S.paratyphiΔcld；
所述S. paratyphiΔcld是敲除cld基因的S. paratyphi。
4.一種延長甲型副傷寒沙門氏菌O抗原糖鏈長度的方法，包括如下步驟：培養權利要求1-3任一所述重組菌，使所述cldLT2基因表達，使重組菌合成糖鏈長度延長的O抗原。
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