[發明專利]一種O抗原糖鏈延長的甲型副傷寒沙門氏菌及其應用

有效

• 申請號: 201410743690.X
• 申請日: 2014-12-08
• 公開（公告）號: CN105734001B
• 公開（公告）日: 2020-04-07
• 發明（設計）人: 吳軍;孫鵬;劉波;唱韶紅;鞏新;王恒樑;朱力;潘超;馮爾玲
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院生物工程研究所
• 主分類號: C12N1/21
• 分類號: C12N1/21;C12N15/74;C12P21/00;A61K39/112;A61P31/04;C12R1/42
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;陳曉慶

本發明公開了一種O抗原糖鏈延長的甲型副傷寒沙門氏菌及其應用。該方法包括如下步驟：滅活甲型副傷寒沙門氏菌的O抗原鏈長控制酶基因cld，得到O?抗原鏈長控制酶基因cld缺陷的甲型副傷寒沙門氏菌；使鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶基因cld_LT2在O?抗原鏈長控制酶基因cld缺陷的甲型副傷寒沙門氏菌中過表達，進而使甲型副傷寒沙門氏菌的O抗原糖鏈長度延長。本發明用O抗原糖鏈長度延長的甲型副傷寒沙門氏菌制備的甲型副傷寒沙門氏菌O多糖?重組融合蛋白結合疫苗rCTB4573₃?OPS_Spty50973和rEPA4573?OPS_Spty50973均能誘導小鼠產生抗甲型副傷寒沙門氏菌的特異性抗體，抗體滴度明顯提高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體涉及一種O抗原糖鏈延長的甲型副傷寒沙門氏菌及其應用。

背景技術

沙門氏菌(Salmonella spp.)是一種具有高度傳染性革蘭氏陰性腸道致病菌，具有較強的內毒素及侵襲力，屬胞內寄生菌，可通過侵襲小腸粘膜致病，引起腸熱癥、胃腸炎以及敗血癥等，嚴重者可導致腸出血或穿孔。對于沙門氏菌大多數血清型，半數感染量在10⁵-10⁸之間，但在暴發流行時，感染量一般都低于10³個菌體，有時甚至少于100個細菌。在亞洲國家中，尤其在我國，由甲型副傷寒沙門氏菌引起的腸道疾病所占比例上升趨勢明顯，研究發現，平均每年每100000人中就有150例甲型副傷寒沙門氏菌感染病例。

目前治療傷寒及副傷寒的主要方式是抗生素，但隨著耐藥性尤其是多重耐藥菌株的出現，常規的抗生素治療遇到了巨大的挑戰，而免疫接種相關疫苗則是有效的預防手段。目前，針對傷寒沙門氏菌的口服減毒活疫苗、Vi莢膜多糖疫苗以及Vi多糖蛋白結合疫苗研發進展迅速，并且有多種產品上市，但這些疫苗均不能對甲型副傷寒沙門氏菌產生有效的交叉保護作用。目前，還沒有針對甲型副傷寒沙門氏菌的疫苗被批準上市。

發明內容

本發明的一個目的是提供一種重組菌。

本發明提供的重組菌，是將鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶基因cld_LT2導入O抗原鏈長控制酶基因cld缺陷的甲型副傷寒沙門氏菌中得到的。

上述重組菌中，所述鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶的氨基酸序列與SEQ IDNo.2所示的氨基酸序列相似性超過90％；

所述鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶Cld_LT2的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；

所述鼠傷寒沙門氏菌O抗原鏈長控制酶Cld_LT2的編碼基因序列如SEQ ID No.1所示。

上述重組菌中，所述O-抗原鏈長控制酶基因cld缺陷的甲型副傷寒沙門氏菌可以通過Red重組技術敲除cld基因，也可以通過同源重組敲除cld基因，或者通過插入滅活cld基因，還可以通過誘變獲得cld基因缺陷的菌株，優選為通過Red重組技術敲除cld基因的方法獲得。

上述重組菌中，所述O-抗原鏈長控制酶基因cld缺陷的甲型副傷寒沙門氏菌的獲得方法具體包括如下步驟：

(1)制備線性打靶DNA片段1，其核苷酸序列如SEQ ID No.11所示，其中含有cat基因；

(2)將pKD46質粒轉化至Salmonella.paratyphi菌中，得到的重組菌記作S.paratyphi/pKD46；

(3)誘導所述S.paratyphi/pKD46菌株中Red重組系統表達，再將所述線性打靶DNA片段1轉化至所述S.paratyphi/pKD46菌株中，所述線性打靶DNA片段1替換所述S.paratyphi/pKD46菌株中的cld基因，得到的重組菌記作S.paratyphi cld::cat/pKD46；