[發明專利]一種貝母素甲的制備方法

在審

• 申請號: 201410742891.8
• 申請日: 2014-12-08
• 公開（公告）號: CN104530178A
• 公開（公告）日: 2015-04-22
• 發明（設計）人: 孫健;張海豐;張立富;于友華;范斌;滕坤;溫慶輝
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院醫學實驗中心
• 主分類號: C07J71/00
• 分類號: C07J71/00;C07J75/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;王春霞

技術領域

本發明涉及一種貝母素甲的制備方法，屬于中藥化學或天然藥物制備領域。

背景技術

百合科貝母屬植物全球約有130種，廣泛分布于北半球的亞、歐及北美洲的溫帶地區，我國有43種，19變種，主要分布于安徽、浙江、四川、新疆、甘肅、湖北、東北三省等，分為浙貝母、湖北貝母、平貝母、伊貝母和川貝母等多種藥物品種，均含有貝母素甲，藥物來源十分廣泛。

貝母素甲(verticine,peimine)為2010年版《中國藥典》中浙貝母的質量控制成分，是一種甾體生物堿，分子式C₂₇H₄₅NO₃，結構式為：

貝母素甲是貝母平喘的主要藥效成分之一，近年來研究表明，貝母素甲通過抑制細菌細胞膜上的主動外排泵來發揮作用，對耐藥金黃色葡萄球菌具有較強的逆轉作用；另外貝母甲素具有抑制腫瘤細胞增殖、轉移，抑制甲狀腺相關眼病患者眼眶成纖維細胞增殖等作用。

現有制備方法主要是柱層析技術和高速逆流色譜技術。其中：

柱層析技術(翟愛華，王麗杰，張東杰等.利用硅膠柱層析分離純化平貝總堿的研究[J].食品科學，2009，30(1)：119-121.)是一種傳統的天然產物提取方法，該法是指將貝母總堿與硅膠混勻，用干法裝柱，上樣，乙酸乙酯-甲醇-氨水為展開劑進行洗脫，合并相同流分，真空濃縮至干，80％甲醇回流2次，4～6℃放置，析出貝母素甲。該方法操作過程繁瑣，同時需要消耗大量乙酸乙酯、甲醇、氨水等有毒、有刺激性氣味且價格昂貴的溶劑，該方法規模較小，僅適合實驗室中操作。

高速逆流色譜技術(CN?100526329C)，該法是指以浙貝母粗提物為進樣物，以氯代烷烴、脂肪醇或脂肪酮、烯酸溶劑組成溶劑系統，經高速逆流色譜制備，所得餾分蒸干后，用氯仿溶解，水洗3次制得貝母素甲。該方法需要用到氯仿或四氯甲烷等有毒且價格昂貴的溶劑，該方法受儀器限制，每次進樣量有限，規模較小，僅適合實驗室中操作。

以上方法的產品收率較低，不但需要甲醇、氯仿等毒性試劑，而且有的生產成本較高，很難大規模工業化生產，僅適用于小規模的純化，不能滿足市場需求。

發明內容

本發明的目的是提供一種貝母素甲的制備方法，該方法操作簡便、無需使用甲醇、氯仿等毒性溶劑，分離量大，工藝簡單、可以工業化大量生產，綜合成本低。

本發明提供的貝母素甲的制備方法，包括如下步驟：

(1)提取：用鹽酸水溶液滲漉提取或用乙醇回流提取貝母，得提取液；

(2)利用大孔吸附樹脂對所述提取液進行分離純化：依次用水、乙醇水溶液Ⅰ和乙醇水溶液Ⅱ進行洗脫，并收集所述乙醇水溶液Ⅱ的洗脫液，經濃縮得濃縮物；

所述乙醇水溶液Ⅰ是由乙醇和水組成，所述乙醇水溶液Ⅰ中乙醇的體積濃度為10％～50％；

所述乙醇水溶液Ⅱ是由乙醇和水組成，所述乙醇水溶液Ⅱ中乙醇的體積濃度為30％～80％；

(3)利用中性氧化鋁柱對所述濃縮物進行純化：用體積濃度為95％的乙醇水溶液進行洗脫，收集洗脫液即得所述貝母素甲。

上述制備方法中，所述貝母可為浙貝母、皖貝母或平貝母，具體可為浙貝母、皖貝母或平貝母的鱗莖。

上述制備方法，步驟(1)中，所述提取之前還包括將所述貝母進行干燥和粉碎的步驟；

所述干燥的溫度為40～60℃，具體可為60℃；干燥時間為1～72小時，具體可為24小時；

所述粉碎中所用篩網的目數為10～40目，具體可為20目。

上述制備方法，步驟(1)中，所述滲漉提取為將所述貝母與所述鹽酸水溶液先混合浸泡，浸泡時間小于等于48小時，具體可浸泡24小時；再用所述鹽酸水溶液滲漉，滲漉時間小于等于72小時，可以0.1mL～10mL/(kg·min)的速度進行滲漉，具體可以3mL/(kg·min)的速度進行滲漉，滲漉至無生物堿反應，收集滲漉液即得所述提取液；

所述浸泡和所述滲漉中，每1kg所述貝母需要3～30L所述鹽酸水溶液，其中浸泡時，每1kg所述貝母具體需要3L～10L所述鹽酸水溶液，具體可為6L；滲漉時，每1kg所述貝母具體需要5L～30L所述鹽酸水溶液，具體可為20L；

所述鹽酸水溶液的摩爾濃度為0.01mol/L～0.5mol/L，具體可為0.1mol/L～0.2mol/L、0.1mol/L或0.2mol/L。