[發明專利]一種基于納米粒子信號探針的拉曼放大檢測凝血酶的方法

在審

• 申請號: 201410741458.2
• 申請日: 2014-12-09
• 公開（公告）號: CN104614358A
• 公開（公告）日: 2015-05-13
• 發明（設計）人: 李雪梅;王琳琳;羅捷
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種基于納米粒子信號探針的拉曼放大檢測凝血酶的方法，其特征在于：制備了一種攜帶有大量拉曼信號分子的核-殼結構的生物條碼作為拉曼信號探針；在凝血酶存在下，與固定在磁珠表面的雙鏈脫氧核糖核酸（以下簡稱DNA）探針結合，釋放其中的一條鏈；留在磁珠上的探針發生滾環復制反應，生成長鏈DNA，與所制備的核-殼結構納米探針上的DNA雜交，捕獲拉曼信號探針，從而檢測拉曼信號。

2.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的方法在磁珠表面結合滾環復制和核-殼結構的納米粒子信號探針來實現雙重信號放大。

3.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于所述的方法用磁珠作為載體，在磁珠表面結合把氨基修飾的DNA，凝血酶適體與其雜交形成雙鏈DNA探針；凝血酶與其適體結合釋放到溶液中，磁珠表面留下單鏈DNA探針作為引物；加入鎖扣式DNA，在T4?DNA連接酶和Phi?29?DNA聚合酶作用下，留下的DNA鏈發生滾環復制反應，生成長鏈DNA。

4.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于制備了金納米粒子（AuNP），通過層層組裝的方法將羅丹明異硫氰酸酯封裝在AuNP和SiO2殼之間；由于一個納米粒子可封裝大量的拉曼信號分子，增大了拉曼信號。

5.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于制備的核殼結構的納米粒子表面修飾兩種DNA鏈，形成生物條碼探針，減少交叉反應。

6.根據權利要求1所述的檢測方法，其特征在于檢測靶標為凝血酶。