[發(fā)明專利]一種水體游離基因污染物的濃集回收方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410737432.0 | 申請日： | 2015-08-04 |
| 公開（公告）號： | CN104498596A | 公開（公告）日： | 2015-07-29 |
| 發(fā)明（設計）人： | 金敏;李君文;王大寧;邱志剛;諶志強;楊棟;劉璐;郭旋 | 申請（專利權）人： | 中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12N15/10 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限責任專利代理事務所 12201 | 代理人： | 陸藝 |
| 地址： | 300050*** | 國省代碼： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 水體 游離 基因 污染物 回收 方法 | ||
1.一種水體游離基因污染物的濃集回收方法，其特征是包括如下步驟：
(1)核酸吸附顆粒的制備：按比例，將12.6g的氯化鋁緩慢加入至2L去離子水中，充分溶解后，加入2mol/L的碳酸鈉水溶液90ml，混勻，調節(jié)pH＝7.2，形成凝膠；靜置6～12h，除去上清，用0.14mol/L的NaCl水溶液洗滌凝膠2次后，再加入0.14mol/L的NaCl水溶液至2L，得到含水氫氧化鋁凝膠，滅菌；將粒度在60～100目的層析用硅膠，經(jīng)過蒸餾水淘洗除去漂在水面上的顆粒后，滅菌，按每300g滅菌后層析用硅膠加入0.5-1L含水氫氧化鋁凝膠的比例，使滅菌后層析用硅膠浸透混勻，烤干，得到核酸吸附顆粒；
(2)洗脫液的配制：將15g氯化鈉、30g胰蛋白胨、15g牛肉粉和3.75g甘氨酸加水至1L，用0.1M氫氧化鈉水溶液調節(jié)pH至9；
(3)將所述核酸吸附顆粒裝入長與直徑比為5-35的過濾柱中并至過濾柱高度的2/3處；將待測水樣以300-50毫升/分鐘的速度勻速流過過濾柱后，再用洗脫液以40-50毫升/分鐘的速度勻速流過過濾柱，用滅菌容器收集流出的洗脫液，即為游離基因污染物的一次濃集液；在無菌條件下，利用注射器將一次濃集液通過孔徑為0.45微米的無菌濾器以除去細菌；除菌后的濾過液加入等體積無水乙醇或異丙醇并靜置0.5-2小時后，離心收集沉淀；用2.5-50毫升的無菌雙蒸水溶解沉淀，即為游離基因污染物的最終濃集液；所述待測水樣與洗脫液的體積比為100：1-5。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種水體游離基因污染物的濃集回收方法，其特征是待測水樣的水源為自來水、純凈水、井水、回用水、二級出水、地表水或生活污水。
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