[發明專利]從福爾馬林固定石蠟包埋的組織樣品中檢測基因表達的方法在審
| 申請號： | 201410737231.0 | 申請日： | 2014-12-05 |
| 公開（公告）號： | CN105713963A | 公開（公告）日： | 2016-06-29 |
| 發明（設計）人： | 茅矛;許青;趙偉潔 | 申請（專利權）人： | 上海藥明康德新藥開發有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京商專永信知識產權代理事務所(普通合伙) 11400 | 代理人： | 鄔玥;葛強 |
| 地址： | 200131 上海市浦*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 福爾馬林 固定 石蠟 包埋 組織 樣品 檢測 基因 表達 方法 | ||
1.一種從福爾馬林固定石蠟包埋的組織樣品中快速檢測基因表達的方法，包括以 下步驟：
(a)將福爾馬林固定石蠟包埋的組織樣品用脫蠟液處理以獲得脫蠟的組織樣品；
(b)將所述脫蠟的組織樣品裂解以獲得組織樣品裂解液；和
(c)直接檢測所述裂解液中的基因表達。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(c)包括直接檢測所述裂解液中的 所述基因的mRNA。
3.如權利要求2所述的方法，其特征在于，步驟(c)包括
提供由報告探針和捕獲探針組成的探針對，
其中所述報告探針包含(1)與所述基因的mRNA雜交的第一核酸序列；(2)連接 在所述第一核酸序列上的熒光標記條形碼；
其中所述捕獲探針包含(1)與所述基因的mRNA雜交的第二核酸序列；(2)連接 在所述第二核酸序列上的生物素；
將所述探針對與所述基因的mRNA雜交形成復合物；
將所述復合物以延伸的狀態固定在具有親和素的基板上；
檢測熒光標記條形碼的信號計數。
4.如權利要求3所述的方法，其特征在于，在步驟(c)中使用nCounter分析系統檢 測所述裂解液的基因表達。
5.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述福爾馬林固定石蠟包埋的組織樣 品為細針穿刺活檢樣品。
6.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述福爾馬林固定石蠟包埋的樣品的 體積大于0.75×10-2mm3。
7.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述福爾馬林固定石蠟包埋的樣品的 體積大于1.5×10-2mm3。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述脫蠟液包含二甲苯。
9.如權利要求1所述的方法，其特征在于，在步驟(b)中使用蛋白酶k將所述脫蠟 的組織樣品裂解。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，將所述裂解液在步驟(c)之前用脫氧核 酸酶處理。
11.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述福爾馬林固定石蠟包埋的組織 樣品是人組織樣品。
12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述人組織樣品是來源于病人的病 理組織樣品。
13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述病理組織樣品是腫瘤組織樣品。
14.如權利要求13所述的方法，其特征在于，所述腫瘤組織來源于選自下組的腫 瘤：小細胞或非小細胞性肺癌、胃癌、腸癌、食道癌、結腸直腸癌、前列腺癌、卵巢 癌、乳腺癌、腦癌、泌尿道癌、腎癌、膀胱癌、惡性黑素瘤、肝癌、子宮癌、胰腺癌、 骨髓瘤癌、子宮內膜癌、頭頸癌、小兒腫瘤、肉瘤。
15.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述基因選自下組：ALK,ROS1和 RET。
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