[發明專利]檢測多糖結合蛋白(LBP)的膠乳增強免疫比濁試劑盒

有效

• 申請號: 201410736344.9
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104407156A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 吳勇泉
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種定量檢測膿度癥標志應急蛋白脂多糖結合蛋白(LBP)的膠乳增強免疫比濁試劑盒及其制備方法和用途。

背景技術

脂多糖結合蛋白(lipopolysaccharide?binding?protein,LBP)是一種分子量為60kDa,456個氨基酸組成的糖蛋白，以單鏈多肽的形式在肝細胞內合成，它屬于I型急性期反應蛋白，存在于人和動物的血清中。LBP既可將細菌脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)多聚體轉換為單聚體,加速LPS與其受體CD14結合,顯著放大LPS的致炎作用；也可加速LPS與靶細胞膜上的清除受體結合,使LPS被靶細胞清除；還可催化LPS與脂蛋白結合,后者可中和LPS的生物學活性,加速體內LPS的清除。LBP的不同作用可能是由不同功能位點決定的。當LBP的某一功能位點與LPS的類脂A結合時,表現為對LPS的增敏作用；而當另一功能位點與LPS的類脂A結合時,則可增強LPS的內化,表現為對LPS的抑制性調理作用。生理條件下，血漿LBP的濃度很低僅達100ng/L,在LPS等致炎因子的作用下，LBP的濃度可升高100-1000倍,如兒童急性胰腺炎和細菌感染時，LBP的濃度可顯著升高。LBP可在幾種體液中檢測到，在急性反應期腹腔的濃度是血漿的1％。經研究證實，LBP血漿水平的升高是炎癥細胞因子IL-1,IL-6,TNFa介導的LBP基因轉錄水平的激活而引起的。因而，與常規用于炎癥診斷的指標相比，LBP的早期檢測是預測全身炎癥反應和膿毒癥的標志指標之一。該檢測可能在細菌性感染的嚴重程度或膿毒癥的早期診斷，肝病晚期合并細菌感染，高危患者(如ICU，器官移植術后或免疫抑制治療的患者)感染性疾病的監測，疾病轉歸的評估，以及指導治療方案的選擇等方面有很高的價值。LBP檢測可廣泛用于ICU病房、外科、感染科、創傷科及新生兒監護室、器官移植科、急診科和治療實驗室等。

對于LBP檢測，現有檢測方法主要有定量方法和定性檢測方法，定量檢測方法有雙抗夾心法(ELISA)、放射免疫分析法、免疫層析法等，其中放射免疫分析法在臨床中有一定的限制。目前通常應用ELISA方法檢測，檢測范圍：0.312-20pg/mL，靈敏度：最小可測0.15pg/mL，特異性：可同檢測重組或天然的待測物質，且與其它相關蛋白無交叉反應，重復性：板內，板間變異系數均<10％。盡管ELISA的靈敏度較高，但其操作復雜，需要較多時間，一般結果為定性或半定量，定量時偏差較大，且線性范圍窄，對于樣品稀釋度不好控制。定性方法主要有免疫層析法，其可以作為定性或半定量檢測方法，可以快速給出結果，定性時不需要特殊儀器，但是不能給出定量數據，而且主觀誤差較大。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種制備成本低廉，穩定性好，易于保存，數據重復性好，檢測靈敏度高，可廣泛應用于臨床生化儀的LBP檢測試劑盒，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明提供一種定量檢測脂多糖結合蛋白(LBP)的膠乳增強免疫比濁試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2，所述試劑R1主要由緩沖液1、穩定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑1組成；所述試劑R2主要由交聯LBP抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩定劑2、防腐劑2、保護劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與LBP抗體之間以共價交聯方式連接。

本發明中的防腐劑1和2是指可以抑制試劑中細菌和微生物污染的一類試劑，對試劑具有防腐殺菌的作用。試劑R2中的保護劑2是一類能夠保護膠乳顆粒表面的抗體的試劑。穩定劑1和2可以保持試劑內的電荷平衡。

本技術方案中的LBP膠乳增強免疫比濁試劑盒，將LBP抗體交聯在聚苯乙烯膠乳微球表面，當血液中的LBP與LBP抗體反應時，帶動聚苯乙烯膠乳微球聚集產生一定濁度，而濁度與血液中的LBP含量在一定范圍成正比，可以用全自動生化儀在400-800nm波長下檢測血液中LBP的含量。

優選地，所述試劑R1中的緩沖液1選自Hepes緩沖液、Tris-HCl緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼砂緩沖液中的任意一種或多種的組合，其pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L；所述試劑R2中的緩沖液2選自PBS緩沖液、硼砂緩沖液、甘氨酸緩沖液、Hepes緩沖液、GOODS緩沖液、MOPS緩沖液中任意一種或多種的組合，其pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L。