[發明專利]檢測多糖結合蛋白(LBP)的膠乳增強免疫比濁試劑盒

有效

• 申請號: 201410736344.9
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104407156A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 吳勇泉
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

1.一種脂多糖結合蛋白檢測試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1和試劑R2，所述試劑R1主要由緩沖液1、穩定劑1、防腐劑1、EDTA、增凝劑和保護劑1組成；所述試劑R2主要由交聯LBP抗體的聚苯乙烯膠乳微球、緩沖液2、穩定劑2、防腐劑2、保護劑2組成，其中聚苯乙烯膠乳微球與LBP抗體之間以共價交聯方式連接。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的緩沖液1選自Hepes緩沖液、Tris-HCl緩沖液、MOPS緩沖液、PBS緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼砂緩沖液中的任意一種或多種的組合，其pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L；所述試劑R2中的緩沖液2選自PBS緩沖液、硼砂緩沖液、甘氨酸緩沖液、Hepes緩沖液、GOODS緩沖液、MOPS緩沖液中任意一種或多種的組合，其pH為7.0～9.0，濃度為25～500mmol/L。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的緩沖液1包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3.5－7.5g/L，生物緩沖液1的pH值為7.2－7.6。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的穩定劑1選自KCl、NaCl、CaCl₂中的任意一種或多種的組合，其質量濃度為0.5％～10％；所述試劑R2中的穩定劑2采用離子穩定劑和懸浮穩定劑配合使用；其中離子穩定劑為NaCl、KCl、Na₂CO3、Na₂SO4或者K₂SO4，懸浮穩定劑為PEG8000、蔗糖、甘油或者葡萄糖。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的防腐劑1為疊氮鈉、硫柳汞或者ProClin300；所述試劑R2中的防腐劑2為疊氮鈉、硫柳汞或ProClin300。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的增凝劑為PEG8000或者葡聚糖。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R2中的聚苯乙烯乳膠微球的表面官能團為氨基、羧基、酰肼、醛基或環氧基，聚苯乙烯乳膠微球的的粒徑在100～600nm。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的保護劑1為牛血清白蛋白；所述試劑R2中的保護劑2為牛血清白蛋白。

9.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的EDTA的濃度為10～100mmol/L。

10.根據權利要求1～9任一權利要求所述的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)試劑R1的制備：

在緩沖液1中加入穩定劑1、增凝劑、防腐劑1、保護劑1和EDTA，攪拌混合均勻，即得試劑R1；

(2)試劑R2的制備：

步驟一：將LBP抗體進行4℃透析，再用緩沖液2將LBP抗體稀釋至2mg/ml，得到LBP抗體稀釋液；將聚苯乙烯膠乳微球用蒸餾水離心、洗滌3次；

步驟二：用緩沖液2將經過步驟一洗滌后的聚苯乙烯膠乳微球稀釋到質量濃度為1％，再加入質量濃度為0.01％-0.1％的EDC，在室溫下攪拌反應30min，反應結束后15000rpm離心洗滌以除去未反應的EDC，然后加入步驟一得到的LBP抗體稀釋液，室溫下攪拌反應30min，再加入終止液終止反應，將得到的反應液15000rpm離心，用緩沖液2洗滌沉淀，重復離心洗滌3次，最后加入緩沖液2、防腐劑2、穩定劑2、保護劑2攪拌混合均勻即得試劑R2。