[發明專利]一種α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201410736308.2
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104458617A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 周歡
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑盒及其制備方法。

背景技術

α-羥丁酸脫氫酶(alpha-hydroxybutyrate?dehydrogenase,a-HBDH)是心肌酶譜中的一種酶，在哺乳動物體內普遍存在。α-羥丁酸脫氫酶廣泛分布于各臟器和組織中，主要分布于心肌紅細胞、白細胞及腎臟等。與血清GOT、LDH、肌酸激酶(CK)一樣廣泛存在于腦細胞中。α-羥丁酸脫氫酶活力與LDH活性的變化呈對應關系，主要代表了LDH1和LDH2等富含H亞基的同工酶的活力。因此常用α-羥丁酸脫氫酶來測量血清中LDH1的活性。α-羥丁酸脫氫酶活性的增高主要見于急性心肌梗塞、惡性貧血、溶血性貧血、骨骼肌損傷、急性肝炎、白血病、傳染性單核細胞增多癥及惡性腫瘤。α-羥丁酸脫氫酶活性的降低主要見于免疫抑制劑、抗癌劑、遺傳性變異的LDH-H亞型欠缺。血清α-羥丁酸脫氫酶能間接反映心肌損傷和集體缺氧的嚴重程度，對診斷心肌疾病和肝病有一定意義，對指導治療和判斷預后有一定幫助。臨床上需要檢測的人群有腹脹、腹痛、心肌梗死、貧血、白血病、肝硬化等。

α-羥丁酸脫氫酶目前已有多種定性和定量的檢測方法可用。現有檢測方法包含紫外動力學法、速率法、酶學比色法、連續檢測法等。其基本原理是采用α-酮丁酸為底物于340nm測定NADH吸光度變化率，根據變化率計算出酶的活性。血清α-羥丁酸脫氫酶的測定是通過它催化的反應速度測量的，這與以免疫實驗將酶作為蛋白質測定比較，其優點是快速、敏感、特異和低消耗。但在實際測定工作中，酶催化濃度測定結果是相對的，它依據測定原理、單位定義和相應的測定條件等。如是否選擇了合適的底物、輔因子、活化劑、變構劑、指示酶、輔助酶、緩沖液、各種抑制劑及其濃度，反應混合液的最適PH、溫度等。例如測定時需要酶和底物在一定溫度下作用一段時間，在此期間，溫度可能會使酶失活，正是由于這些原因，使得α-羥丁酸脫氫酶的測定質量控制遠遠落后于其他生化項目。如存在著試劑昂貴，穩定性差，測量結果準確度低，靈敏度低，抗干擾性弱，操作繁瑣，耗時長等缺點。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種檢測時間短，穩定性好、重復性好、精確度高、檢測靈敏度高、線性測試范圍寬、抗干擾性強的α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑盒，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明的第一方面提供一種α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑盒，由彼此獨立的試劑R1和試劑R2組成；其中試劑R1的組分包括：生物緩沖液1、金屬離子絡合物、α-羥丁酸脫氫酶反應底物、表面活性劑1、防腐劑1；試劑R2的組分包括：生物緩沖液2、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原態、激活劑、表面活性劑2、防腐劑2。

優選的，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選自磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合；更優選Tris緩沖液，其原因是Tris緩沖液堿性較強，可調節PH范圍廣，對生物化學過程干擾很小，不與鈣、鎂離子及重金屬離子發生沉淀。所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合。

優選的，所述R1試劑中，生物緩沖液1的濃度為20～200mmol/L，PH7.0-7.5；R2試劑中，生物緩沖液2的濃度為20～200mmol/L，PH7.0-7.5。

優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明對所述試劑R1中的生物緩沖液1進行了改進，所述試劑R1中的生物緩沖液1包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3.5－7.5g/L，生物緩沖液1的pH值為7.2－7.6。

優選的，各組分在生物緩沖液1中的濃度為：

所述生物緩沖液1的溶劑為水。

所述生物緩沖液1可以采用本領域內公知的各種pH調節劑來進行pH調節。

優選的，所述R1試劑中，金屬離子絡合物選自乙二胺四乙酸二鈉、氨基三乙酸、二亞乙基三胺五乙酸中的一種或多種的組合，濃度為1～5mmol/L。更優選乙二胺四乙酸二鈉，其原因是乙二胺四乙酸二鈉具有廣泛的配位性能，幾乎能與所有的金屬離子形成穩定的螯合物，。

優選的，所述R1試劑中，α-羥丁酸脫氫酶反應底物為α-酮丁酸，濃度為2～10mmol/L。