[發明專利]一種α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑盒及其制備方法

在審

• 申請號: 201410736308.2
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104458617A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 周歡
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

1.一種α-羥丁酸脫氫酶檢測試劑盒，由彼此獨立的試劑R1和試劑R2組成；其中試劑R1的組分包括：生物緩沖液1、金屬離子絡合物、α-羥丁酸脫氫酶反應底物、表面活性劑1、防腐劑1；試劑R2的組分包括：生物緩沖液2、煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原態、激活劑、表面活性劑2、防腐劑2。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選自磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自磷酸鹽緩沖液、Tris緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸緩沖液或檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中的一種或多種的組合。

3.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，生物緩沖液1的濃度為20～200mmol/L，PH7.0-7.5；R2試劑中，生物緩沖液2的濃度為20～200mmol/L，PH7.0-7.5。

4.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，金屬離子絡合物選自乙二胺四乙酸二鈉、氨基三乙酸、二亞乙基三胺五乙酸中的一種或多種的組合，濃度為1～5mmol/L。

5.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，α-羥丁酸脫氫酶反應底物為α-酮丁酸，濃度為2～10mmol/L。

6.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R1試劑中，所述表面活性劑1為椰子油脂肪酸二乙醇酰胺，濃度為5～55mmol/L。

7.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述防腐劑1選自疊氮鈉、硫柳汞、ProClin300中的一種；所述R2試劑中，所述防腐劑2選自疊氮鈉、硫柳汞、ProClin300中的一種。

8.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述R2試劑中，所述煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原態的濃度為0.5～2mmol/L；所述R2試劑中，所述激活劑為磷脂酰膽堿，濃度為2～20mmol/L。

9.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中的生物緩沖液1包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3.5－7.5g/L，生物緩沖液1的pH值為7.2－7.6。

10.根據權利要求1～9任一權利要求所述的試劑盒的制備方法和使用方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)按照比例分別配置試劑R1、試劑R2，按照需要的α-羥丁酸脫氫酶參考校準品濃度將相應的α-羥丁酸脫氫酶標準品分別加入校準品中，制備得到含有不同濃度α-羥丁酸脫氫酶標準品的一組校準品，并繪制標準曲線；

(2)將待測樣本與試劑R1和R2按一定比例混合，使其充分反應；

(3)用全自動生化分析儀測定單位時間內吸光度變化率△A/min；

(4)根據吸光度變化率計算出樣本中α-羥丁酸脫氫酶的活性。