[發明專利]一種甘膽酸檢測試劑盒及其制備方法

有效

• 申請號: 201410736234.2
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104459113A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 李元麗
• 申請（專利權）人: 重慶中元生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/546
• 分類號: G01N33/546
• 代理公司: 上海光華專利事務所 31219
• 代理人: 郭婧婧;許亦琳

技術領域

本發明涉及生物檢測領域，特別是涉及一種甘膽酸檢測試劑盒及其制備方法和用途。

背景技術

甘膽酸(Cholyglycine,CG)是膽酸與甘氨酸結合而成的結合型膽酸，在肝細胞內，膽固醇經過及其復雜的酶促反應，轉變成初級膽汁酸。其中有膽酸(CA)和鵝去氧膽酸(CD-CA)。膽酸的類固醇核上有三個羥基(C3、C7、C12)，側鏈末端的羥基以肽鍵與甘氨酸結合。

CG由肝細胞合成，正常代謝途徑為腸肝循環，經毛細膽管、膽管排入膽囊，隨同膽汁進入十二指腸，幫助食物消化。95％膽酸在回腸末端重吸收，經門靜脈再回肝臟，由肝細胞攝取再利用。在血清中主要以蛋白結合形式存在，溢入體循環的總量小于1％。在正常情況下，外周血中膽酸含量甚微,正常成人無論空腹或餐后,其血清CG濃度穩定在低水平。當肝細胞受損時，肝細胞攝取CG能力下降，致使血中CG含量增高；膽汁郁滯時，肝臟排泄膽酸發生障礙，而返流血液循環的CG含量增高，也使血CG含量增高。測定血清甘膽酸(CG)是評價肝細胞功能及其肝膽系物質循環功能的敏感指標之一。

臨床上急性肝炎、慢性活動性肝炎、原發性肝癌、肝硬化、慢遷肝、梗阻性肝病、腸—肝循環障礙、膽石癥伴黃疸、膽管、膽囊排泄功能障礙患者血CG均明顯高于正常人。

甘膽酸同時也是妊娠晚期血清中最主要的膽汁酸組分。正常妊娠時孕婦血清CG水平隨孕周逐步增高，大量雌激素會引起肝細胞膜的改變，減少竇狀膜漿的流動性，從而出現膽汁分泌減少，返流入血，出現妊娠期內膽汁淤積現象，CG水平升高。胎盤絨毛靜脈腔內外均處于高濃度膽汁酸刺激之中，引起血管收縮，胎盤絨毛表面血管痙攣，氧合血流量減少，導致胎兒缺氧，可出現各種并發癥，如胎兒宮內窘迫、早產等。

目前已知的甘膽酸檢測方法有放射免疫法(RIA)、酶聯免疫吸附法(ELISA)、化學發光法(CL)等。但這些方法均存在較多缺陷，如放射免疫法同位素試劑具有放射性污染及有效期較短和操作不方便等弊端，酶聯免疫吸附法操作較為繁瑣，耗時較長，不適宜臨床上使用。化學發光法盡管靈敏度較高，但需要專用的測定設備，費用較高不利于推廣。而膠乳增強免疫比濁法操作簡便、可適用于全自動生化分析儀，檢測時間不到10分鐘適合臨床推廣。但目前我國市場上的甘膽酸檢測試劑盒準確度、靈敏度、重復性仍然較差。

發明內容

鑒于以上所述現有技術的缺點，本發明的目的在于提供一種檢測時間短，穩定性好、重復性好、精確度高、檢測靈敏度高、線性測試范圍寬、抗干擾性強的甘膽酸檢測試劑盒，用于解決現有技術中的問題。

為實現上述目的及其他相關目的，本發明的第一方面提供一種甘膽酸檢測試劑盒，包括彼此獨立的試劑R1、試劑R2和校準品，所述試劑R1的組分包括：生物緩沖液1、保護劑1、反應增強劑1、表面活性劑1、防腐劑1、穩定劑1；試劑R2的組分包括：生物緩沖液2、抗甘膽酸抗體的膠乳顆粒、保護劑2、反應增強劑2、表面活性劑2、防腐劑2、穩定劑2；校準品的組分包括：生物緩沖液3、保護劑3、防腐劑3、甘膽酸標準品、穩定劑3。

優選的，所述試劑R1中，所述生物緩沖液1選自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或多種的組合；所述試劑R2中，所述生物緩沖液2選自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或多種的組合；校準品中，所述生物緩沖液3選自氨基丁三醇緩沖液、磷酸鹽緩沖液、Tris-HCL緩沖液、甘氨酸緩沖液、硼酸鹽緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液中的一種或多種的組合。

更優選的，所述試劑R1中，生物緩沖液1的濃度為20～200mmol/L，PH6.5-7.5；所述試劑R2中，生物緩沖液2的濃度為20～200mmol/L，PH6.5-7.5；校準品中，生物緩沖液3的濃度為20～200mmol/L，PH6.5-7.5。

本發明中，各生物緩沖液的主要作用是保證試劑中各組分PH值保持在一定范圍內，保證各組分性能穩定，最終保證整個試劑盒的性能穩定，測試結果穩定可靠。

優選的，為了使得試劑盒具有更佳的靈敏度和顯色效果，本發明對所述試劑R1中的生物緩沖液1進行了改進，所述試劑R1中的生物緩沖液1包括下列組分：水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉和甘氨酸，且水蘇糖、明礬、果糖二磷酸鈉、六偏磷酸鈉、甘氨酸的總濃度為3.5－7.5g/L，生物緩沖液1的pH值為7.2－7.6。

優選的，各組分在生物緩沖液1中的濃度為：