[發明專利]一種劍葉龍血樹愈傷組織誘導及防褐化的方法

有效

• 申請號: 201410735185.0
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104472362A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 韋瑩;韋坤華;李翠;李林軒;王一諾;黃雪彥;繆劍華;王曉峰
• 申請（專利權）人: 廣西壯族自治區藥用植物園
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣西南寧公平專利事務所有限責任公司 45104
• 代理人: 黃永校

1.一種劍葉龍血樹的愈傷組織誘導及防褐化的方法，其特征在于：該方法包括以下步驟：

(1)外植體的消毒：取劍葉龍血樹種子作為外植體，先用洗潔精水溶液清洗種子表面污垢，置于燒杯中進行流水沖洗5～8min，然后移至超凈工作臺上，用75％酒精將種子浸泡30S，無菌水沖洗1遍，再用添加了1-2滴吐溫-20的100ml濃度為0.1％HgC1₂消毒8～15min，無菌水浸泡3次，用無菌濾紙吸干外植體表面水分后進行接種，其中無菌水為經高壓滅菌的蒸餾水；

(2)種子誘導：將步驟(1)得到的外植體接種到MS誘導培養基中，在培養溫度為25±2℃，光照強度20～30μmol/(m²·s)，光照時間為12h/d的條件下培養15d，種子發芽，所述種子誘導MS誘導培養基為MS基本培養基中加入0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.1mg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

(3)芽誘導獲得愈傷組織：將步驟(2)中得到的無菌芽置于MS誘導培養基中，在培養溫度25±2℃，光照強度20～30μmol/(m²·s)，光照時間為10h/d的條件下培養7d開始萌發，15d便形成愈傷組織，所述芽誘導MS誘導培養基為MS基本培養基中加入0.1～2.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.05～0.5mg/L的噻重氮苯基脲TDZ、0.1～1.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1～1.0mg/L的2,4-二氯苯氧乙酸2,4-D，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

(4)愈傷組織增殖培養：將步驟(3)中得到的愈傷組織置于MS增殖培養基中，培養溫度25±2℃，光照強度20～30μmol/(m²·s)，MS增殖培養基為MS基本培養基中加入0.1～1.0mg/L的6-芐基腺嘌呤6-BA、0.5～2.0mg/L的萘乙酸NAA、0.1～0.5mg/L的激動素KT,30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8；

(5)防褐化培養：將步驟(4)中得到的愈傷組織置于MS防褐化培養基中，在培養溫度25±2℃，光照強度20～30μmol/(m²·s)，光照時間為10h/d的條件下培養分別培養40d，MS防褐化培養基為MS基本培養基中加入防褐添加劑20～100mg/L的VC，0.5～2.0g/L的活性炭，30g/L蔗糖，4.5g/L的瓊脂，培養基的pH值為5.8。