[發明專利]一種提高甜葉菊NaN3離體誘變突變率的方法

有效

• 申請號: 201410729720.1
• 申請日: 2014-12-05
• 公開（公告）號: CN104351059B
• 公開（公告）日: 2017-09-29
• 發明（設計）人: 何克勤;崔然;胡能兵
• 申請（專利權）人: 安徽科技學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

一種提高甜葉菊NaN₃離體誘變突變率的方法，涉及植物誘變育種技術領域，更具體的說是一種利用NaN₃誘變劑提高甜葉菊組培苗變異率的方法。

背景技術

甜葉菊是菊科多年生草本植物，其葉片中含有甜菊糖甙，其甜度為蔗糖的300倍，是目前已知最甜的天然糖料，已廣泛應用于食品、飲料、醫藥等行業。甜葉菊甜味劑在體內不參加代謝，不蓄積，不致癌，無毒性，具有防治高血壓、糖尿病、肥胖癥、心臟病和齲齒等疾患的藥用價值，被譽為最有發展前途的新糖源，是繼甘蔗、甜菜之后又一種極具開發價值和健康推崇的天然蔗糖替代品，在國際上被譽為“世界第三糖源”。

甜葉菊為異化授粉植物，群體的基因組成多為雜合型，遺傳不穩定，其后代難以保持原有的優良性狀，而且種子小，極易喪失活力，種子帶菌又會導致苗期及后期發生病害。目前全國現有的甜葉菊有性種植品種嚴重退化，總糖甙含量、A3甙含量低，而現有的無性種植品種葉產量低，這一生產現狀迫切需要對品種進行育種改良和提高品種的品質。將現代誘變育種、倍性育種、分子育種等育種技術與植物組織培養技術相結合是實現這一目標的基本途徑，這些技術在作物和花卉育種方面取得了許多成就。常規的誘變育種是將接種材料先放入誘變劑溶液中浸泡誘變幾個小時，再用蒸餾水清洗后接種到培養基中，誘變劑持續時間較短，產生突變植株較少。

本發明通過將NaN₃直接加入培養基中進行誘導，在合適的階段將甜葉菊莖段轉接到MS培養基中培養，可提高甜葉菊莖段再生苗的突變率，創造出更多新種質材料，為甜葉菊種質及品種的改良所需優良親本材料奠定基礎。

發明內容

本發明的目的在于提高甜葉菊誘變時再生苗的突變率，創造出新的種質材料，為甜葉菊育種中種質及品種的改良提供親本材料，為提高甜葉菊品種的品質奠定基礎。

本發明是這樣實現的：

一種提高甜葉菊NaN₃離體誘變突變率的方法包括以下技術環節：

①培養基配方：MS培養基中加入30g/L蔗糖、2mg/L誘變劑NaN₃、5 g/L瓊脂和生長激素6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L；

②培養基分裝：按上述配方將配制好的培養基分裝入250ml的組織培養瓶中進行高壓滅菌，每升分裝為24瓶；

③接種：在超凈工作臺上用剪刀將甜葉菊組培苗剪0.5 cm長短帶2葉片的莖段，用鑷子將莖段接種到培養瓶中，每瓶接種5個莖段；

④培養條件：將接種好的組培瓶放入組培室中培養，培養溫度25±1℃，光照強度1500 lx，光照時間12h/d；

⑤轉接時間：待培養基中的甜葉菊莖段頂部及莖段上兩葉片枯死時，將莖段移入不加任何激素的MS培養基中進行培養，培養條件同上；

⑥突變率檢測：莖段上腋芽恢復生長半個月后，取單株進行DNA提取和SRAP分子檢測，突變率高達55-60%。

本發明的有益效果：

本發明通過向培養基中加入NaN₃誘變劑進行較長時間持續誘變，待甜葉菊莖段頂部及莖段上兩葉片枯死時，再將莖段移入不加任何激素和誘變劑的MS培養基中再進行培養，可顯著地提高了甜葉菊再生苗的突變率，解決了接種前直接浸泡誘變再生苗突變率較低的問題，同時也可創造出大批新種質材料，為甜葉菊種質及品種的改良提供親本材料。

具體實施方式：

一種甜葉菊組培苗誘變方法：

①培養基配方：MS培養基中加入30g/L蔗糖、2mg/L誘變劑NaN₃、5 g/L瓊脂和生長激素6-BA 1.0 mg/L、NAA 0.2 mg/L；

②培養基分裝：按上述配方將配制好的培養基分裝入250ml的組織培養瓶中進行高壓滅菌，每升分裝為24瓶；

③接種：在超凈工作臺上用剪刀將甜葉菊組培苗剪為0.5 cm長短帶2葉片的莖段，用鑷子將莖段接種到培養瓶中，每瓶接種5個莖段；

④培養條件：將接種好的組培瓶放入組培室中培養，培養溫度25±1℃，光照強度1500 lx，光照時間12h/d；

⑤轉接時間：待培養基中的甜葉菊莖段頂部及莖段上兩葉片枯死時，將莖段移入不加任何激素的MS培養基中進行培養，培養條件同上。

試驗情況：

試驗于2012年10月20日在安徽科技學院農學院組培室進行。按照上述配方及操作方法進行甜葉菊組培苗莖段的誘變處理，以2mg/L NaN₃誘變劑直接進行浸泡誘變24小時為對照。