[發明專利]一種牛角瓜組織培養的方法

有效

• 申請號: 201410729059.4
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104488710A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發明（設計）人: 陳志;呂永平;汪一婷;牟豪杰;周迪江;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

技術領域

本發明涉及植物組織培養技術，具體涉及一種牛角瓜組織培養的方法。

背景技術

牛角瓜(Calotropis?gigantea(Linn.)Dry.ex?Ait.f)，別名斷腸草、羊浸樹、哮喘樹、皇冠花等，為蘿藦科牛角瓜屬多年生草本植物，在亞洲、美洲、非洲均有分布，我國主要分布于兩廣、海南、福建、云南、四川等省區。牛角瓜耐旱、耐貧瘠能力強，常生于干旱或半干旱的曠野地，可作為干旱地帶荒地、貧瘠地綠化先鋒植物，而且生長迅速，每周生長最快約30厘米，植株可高達3m，可起到防風、保土、保水的功效，可作為貧瘠土地改良的先鋒植物。

牛角瓜全身是寶，具有多種利用價值及廣闊的市場前景。牛角瓜整個植株無論老嫩均可用作肥料；牛角瓜纖維可用于生產中高檔針織產品、紙張及人造棉等，種毛可供制作絲絨原料，在紡織領域具有廣闊的應用前景；牛角瓜的乳液中含有大量的碳氫化合物及某些烴類物質，與天然原油成分相近，1公頃的牛角瓜可提煉出一萬多升的原油，也可用于提取生物農藥制劑，乳液干燥后可供作黃色染料、樹膠原料及鞣料等；此外牛角瓜還具有多種藥用價值，其干葉具袪痰、止咳等功效；乳汁具抗炎、抗凝血、強心及驅蟲等作用，樹皮亦可用于治療癩癬。

目前，牛角瓜栽培常用種子進行繁殖,但種子數量有限，同時由于生長環境限制，自然狀態下，種子萌發率較低，無法同時獲得大量優質種苗。植物組織培養是目前最有效的植物種苗快速繁殖的方法，目前關于牛角瓜組織培養研究報道國內僅見李克烈等1篇，其主要是利用無菌萌發苗葉片為起始材料，通過先誘導愈傷再誘導愈傷分化的方式獲得牛角瓜再生植株；國外僅見Ashis?T.Roy等利用子葉、幼嫩葉片和莖段為起始材料，誘導出愈傷之后利用液體懸浮培養技術對愈傷進行擴繁，然后對擴繁愈傷進行分化誘導從而獲得牛角瓜再生植株的研究報道。在植物組培過程中，通過愈傷途徑獲得再生植株后代變異較高，后代品質差異較大，相對于通過誘導愈傷獲得的植株再生途徑，利用直接器官發生途徑獲得再生植株可極大降低組培過程中導致的變異發生，但是關于牛角瓜通過直接器官發生獲得再生植株尚未見報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術存在的不足，而提供一種牛角瓜組織培養的方法。本發明擬解牛角瓜利用種子無菌萌發獲得的無菌材料，通過直接誘導不定芽途徑建立良好的牛角瓜組培再生體系，為牛角瓜優良種植擴繁、新品種培育及遺傳改良等做好技術支持。

本發明的目的是通過如下技術方案來完成的。這種牛角瓜組織培養的方法，該方法包括如下步驟：

1)、外植體的選取及處理：選取牛角瓜種子作為起始材料，從牛角瓜果實中將種子取出，去除種子表面纖維之后經過浸種2h后，選擇沉在容器底部的種子作為組培用外植體；

2)、種子萌發：在超凈工作臺上，將經過表面消毒的牛角瓜種子轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于種子萌發培養基MS或1/2MS培養基中進行種子萌發，培養溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；

3)不定芽誘導：在無菌工作臺上，由種子萌發獲得的無菌苗從腋芽下方每兩個芽為一個單位切段，帶芽莖段接種于不定芽誘導培養基進行不定芽的誘導，不定芽誘導培養基為MS+6-BA?3.0～5.0mg/L+NAA?0.05～0.2mg/L+PVP?0.1～0.5g/L中，進行不定芽的誘導，培養溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；

4)不定芽增殖：在無菌工作臺上，將誘導獲得的1～2cm高的叢生不定芽從基部以2～3個連在一起的不定芽為一個接種單元分離，將分離材料接種于不定芽增殖培養基中增殖，不定芽增殖培養基為MS+6-BA?1.0～3.0mg/L+NAA?0.05～0.2mg/L+PVP?0.1～0.5g/L，培養溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；