[發(fā)明專利]一種牛角瓜組織培養(yǎng)的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410729059.4
• 申請日: 2015-08-03
• 公開（公告）號: CN104488710A
• 公開（公告）日: 2015-07-29
• 發(fā)明（設計）人: 陳志;呂永平;汪一婷;牟豪杰;周迪江;陳劍平
• 申請（專利權）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司 33101
• 代理人: 陳繼亮

1.一種牛角瓜組織培養(yǎng)的方法，其特征在于：該方法包括如下步驟：

1)、外植體的選取及處理：選取牛角瓜種子作為起始材料，從牛角瓜果實中將種子取出，去除種子表面纖維之后經(jīng)過浸種2h后，選擇沉在容器底部的種子作為組培用外植體；

2)、種子萌發(fā)：在超凈工作臺上，將經(jīng)過表面消毒的牛角瓜種子轉移至無菌接種盤中，用無菌濾紙吸去外植體表面水分，接種于種子萌發(fā)培養(yǎng)基MS或1/2MS培養(yǎng)基中進行種子萌發(fā)，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；

3)不定芽誘導：在無菌工作臺上，由種子萌發(fā)獲得的無菌苗從腋芽下方每兩個芽為一個單位切段，帶芽莖段接種于不定芽誘導培養(yǎng)基進行不定芽的誘導，不定芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA?3.0～5.0mg/L+NAA?0.05～0.2mg/L+PVP?0.1～0.5g/L中，進行不定芽的誘導，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；

4)不定芽增殖：在無菌工作臺上，將誘導獲得的1～2cm高的叢生不定芽從基部以2～3個連在一起的不定芽為一個接種單元分離，將分離材料接種于不定芽增殖培養(yǎng)基中增殖，不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA?1.0～3.0mg/L+NAA?0.05～0.2mg/L+PVP?0.1～0.5g/L，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；

5)、不定芽生根誘導：將高生長到3～4cm的叢生不定芽從基部單個分離，接入生根培養(yǎng)基中進行不定根的誘導,生根培養(yǎng)基為MS+IBA?0.01～0.5mg/L+PVP?0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA?0.01～0.5mg/L+PVP?0.1～0.5g/L，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1；

6)、組培苗馴化及移栽：叢生不定芽基部長出4～6條2～3cm的不定根后，將生根苗移至溫室，散射光培養(yǎng)3～5d后再打開瓶蓋培養(yǎng)1～2d，將牛角瓜組培苗小心從培養(yǎng)瓶中連根取出，用自來水洗凈組培苗表面的培養(yǎng)基,然后在通風陰涼處稍晾干組培苗表面水分后將牛角瓜組培苗，栽入基質(zhì)中，保濕90％以上培養(yǎng)15d，然后在溫室中正常培養(yǎng)；

種子萌發(fā)、不定芽誘導及增殖、不定芽生根誘導基本培養(yǎng)基均為MS培養(yǎng)基，蔗糖用量為25～40g/L，凝固劑為瓊脂粉，用量為8～9g/L，PVP用量為0.1～0.5g/L，培養(yǎng)基pH分裝前調(diào)整為5.6～5.8；種子萌發(fā)培養(yǎng)基為MS或1/2MS培養(yǎng)基；不定芽誘導培養(yǎng)基為MS+6-BA?3.0～5.0mg/L+NAA?0.05～0.2mg/L+PVP?0.1～0.5g/L；不定芽增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA?1.0～3.0mg/L+NAA?0.05～0.2mg/L+PVP?0.1～0.5g/L；生根培養(yǎng)基為MS+IBA?0.01～0.5mg/L+PVP?0.1～0.5g/L或1/2MS+IBA?0.01～0.5mg/L+PVP?0.1～0.5g/L；種子萌發(fā)、不定芽誘導及增殖、不定芽生根培養(yǎng)條件為，培養(yǎng)溫度25±2℃，光照時間為12～16h/d，光照強度為40～60μ·mol·m^-2·s^-1。

2.根據(jù)權利要求1所述的牛角瓜組織培養(yǎng)的方法，其特征在于：起始外植體的選擇及處理、種子萌發(fā)、不定芽誘導、不定芽增殖、生根誘導、移栽前馴化過程及移栽后保濕90％以上培養(yǎng)15d。