[發(fā)明專利]一種阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410727583.8
• 申請(qǐng)日: 2014-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN104407146A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉麗;王玉金;王亞南;楊書豪;安明理;何蔚葒;杜迅;李?yuàn)檴?/a>;陳國參
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務(wù)所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及藥物檢測(cè)，特別是一種阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法。

背景技術(shù)

阿維菌素作為一種十六元大環(huán)內(nèi)酯新型殺蟲劑，由鏈霉菌中阿維鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生，因化學(xué)結(jié)構(gòu)新穎、作用機(jī)制獨(dú)特（干擾蟲體的神經(jīng)生理活動(dòng)，刺激釋放γ-氨基丁酸，從而抑制節(jié)肢動(dòng)物的神經(jīng)傳導(dǎo)）、殺蟲活性強(qiáng)，具有廣譜、高效、持效、相對(duì)安全等特點(diǎn)，符合現(xiàn)代生態(tài)農(nóng)藥要求，被廣泛用于體內(nèi)外各種線蟲，節(jié)肢動(dòng)物類寄生蟲和昆蟲等的驅(qū)殺。目前全球正大面積推廣使用阿維菌素產(chǎn)品。但隨著害蟲抗性提高，阿維菌素用藥量不斷增加，對(duì)環(huán)境及人類、動(dòng)植物危害也日益顯現(xiàn)，主要表現(xiàn)為田間土壤的藥物殘留、人和動(dòng)物中樞和外周神經(jīng)癥狀，如震顫、共濟(jì)失調(diào)、精神抑郁、高度昏迷乃至死亡，并產(chǎn)生胚胎毒性。按世界衛(wèi)生組織（WTO）5級(jí)分類標(biāo)準(zhǔn)，將其列為高毒化合物。

鑒于此，土壤及動(dòng)植物產(chǎn)品中阿維菌素藥物殘留檢測(cè)成為國家重點(diǎn)監(jiān)控指標(biāo)，阿維菌素藥物殘留檢測(cè)方法也成為重點(diǎn)研究內(nèi)容。目前，關(guān)于阿維菌素殘留檢測(cè)方法主要為色譜檢測(cè)法和免疫檢測(cè)法，色譜檢測(cè)法有薄層色譜法、液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法等，這些檢測(cè)方法存在樣品前處理復(fù)雜、需要專業(yè)操作人員、需要昂貴儀器花費(fèi)較高等不足，常用于阿維菌素藥物殘留的確證分析；免疫檢測(cè)法有酶聯(lián)免疫法，此方法簡單、快速，避免了色譜檢測(cè)法的不足，適合于快速、大量樣品篩查，極易推廣。膠體金免疫層析技術(shù)（gold?immunochromatographic?assay，GICA）是在酶聯(lián)免疫法基礎(chǔ)上發(fā)展的又一種新型快速免疫檢測(cè)技術(shù)，阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條即是在膠體金免疫層析技術(shù)基礎(chǔ)上融合現(xiàn)代單克隆抗體技術(shù)、新材料技術(shù)建立的一種簡單、快速、經(jīng)濟(jì)的免疫檢測(cè)方法，該檢測(cè)試紙條操作較酶聯(lián)免疫法更簡單、快速、更易判斷結(jié)果，是又一種新型、經(jīng)濟(jì)、環(huán)保的檢測(cè)阿維菌素的技術(shù)方法。目前阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條在國內(nèi)外尚為空白。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述情況，為克服現(xiàn)有技術(shù)之缺陷，本發(fā)明之目的就是提供一種阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法，可有效解決對(duì)阿維菌素的快速檢測(cè)問題。

本發(fā)明解決的技術(shù)方案是，該試紙條是由，PVC基板上自左至右覆蓋有引水玻璃纖維層、載體玻璃纖維層、硝酸纖維層和吸水棉漿板層，吸水棉漿板層和硝酸纖維層的1/2處上面覆蓋有右部覆膜（又稱上部覆膜），引水玻璃纖維層、載體玻璃纖維層和硝酸纖維層的1/2處上面覆蓋有左部覆膜（又稱下部覆膜），硝酸纖維層上自上而下（自右向左）包被有一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)線，載體玻璃纖維層上吸附包被有膠體金標(biāo)記物，其制備方法由以下步驟實(shí)現(xiàn)：

1、制備單克隆抗體膠體金標(biāo)記物：

將含有抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的小鼠腹水與醋酸緩沖液混合，再加入辛酸，離心，得上清液，過濾，調(diào)pH值后，加入硫酸銨溶解，離心沉淀，沉淀物用磷酸鹽緩沖液（PBS）溶解，再用磷酸鹽緩沖液透析，成單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；

2、制備膠體金溶液：

將煮沸的蒸餾水中氯金酸溶液和檸檬酸三鈉溶液，攪拌成深紅色，冷卻，調(diào)pH值至等電點(diǎn)或弱堿性，成膠體金溶液；

3、制備膠體金標(biāo)記物：取膠體金溶液加入單克隆抗體膠體金標(biāo)記物，攪拌反應(yīng)，加入牛血清白蛋白，離心，得沉淀，用PBS稀釋，成膠體金標(biāo)記物；

4、固化膠體金標(biāo)記物：在載體玻璃纖維層上吸附包被膠體金標(biāo)記物，干燥，將膠體金標(biāo)記物固化在載體玻璃纖維層上；

5、包被膜制備：取抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，分別包被于硝酸纖維層上，自上而下（自右向左）形成包被的一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)線；

6、切割：將包括吸附有膠體金標(biāo)記物的載體玻璃纖維層、包被抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的硝酸纖維層后的試紙條載體切割成長條，即成本發(fā)明試紙條。

本發(fā)明結(jié)構(gòu)簡單，易生產(chǎn)制備，使用方便，準(zhǔn)確率高，效果好，有效用于快速檢測(cè)阿維菌素，是檢測(cè)阿維菌素上的創(chuàng)新，經(jīng)濟(jì)和社會(huì)效益巨大。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的結(jié)構(gòu)立體圖。

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合附圖和具體情況對(duì)本發(fā)明的具體實(shí)施方式作詳細(xì)說明。