[發(fā)明專利]一種阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410727583.8
• 申請(qǐng)日: 2014-12-02
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN104407146A
• 公開(kāi)（公告）日: 2015-03-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉麗;王玉金;王亞南;楊書(shū)豪;安明理;何蔚葒;杜迅;李?yuàn)檴?/a>;陳國(guó)參
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 河南省科學(xué)院生物研究所有限責(zé)任公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577
• 代理公司: 鄭州天陽(yáng)專利事務(wù)所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，該試紙條是PVC基板（1）上自左至右覆蓋有引水玻璃纖維層（3）、載體玻璃纖維層（4）、硝酸纖維層（2）和吸水棉漿板層（5），吸水棉漿板層（5）和硝酸纖維層（2）的1/2處上面覆蓋有右部覆膜（6），引水玻璃纖維層（3）、載體玻璃纖維層（4）和硝酸纖維層（2）的1/2處上面覆蓋有左部覆膜（7），硝酸纖維層（2）上自上而下包被有一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)線，載體玻璃纖維層（4）上吸附包被有膠體金標(biāo)記物，其制備方法由以下步驟實(shí)現(xiàn)：

（1）、制備單克隆抗體膠體金標(biāo)記物：

將以體積計(jì)的：1份含有抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的小鼠腹水與2份60mM醋酸緩沖液混合，室溫?cái)嚢柘轮鸬渭尤胄了幔?ml?小鼠腹水加入33μl辛酸，混勻，室溫放置30分鐘，15000轉(zhuǎn)/分?4℃離心20分鐘，得上清液，上清液用玻璃棉過(guò)濾，棄沉淀，過(guò)濾后的上清液用NaOH調(diào)pH值至7.2，加入硫酸銨，每1ml?pH7.2上清液加入0.277g硫酸銨，快速使硫酸銨溶解，室溫?cái)嚢?0分鐘，15000轉(zhuǎn)/分?4?℃離心20分鐘，棄上清液，得沉淀物，沉淀物用原小鼠腹水1/2體積的0.01M磷酸鹽緩沖液溶液溶解，再用0.01M磷酸鹽緩沖液4℃透析48小時(shí)，成單克隆抗體膠體金標(biāo)記物；

（2）、制備膠體金溶液：

將蒸餾水煮沸4～6分鐘，每1000mL蒸餾水中加入質(zhì)量濃度1%的氯金酸溶液10ml和質(zhì)量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液15～20ml，攪拌至溶液呈深紅色，冷至室溫，調(diào)pH值至抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體的等電點(diǎn)或弱堿性，成抗阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物單克隆抗體預(yù)標(biāo)記的膠體金溶液；

（3）、制備膠體金標(biāo)記物：取步驟（3）制備的膠體金溶液100ml，加入步驟（2）制備的單克隆抗體膠體金標(biāo)記物1～10μg/ml，攪拌反應(yīng)2分鐘，加入質(zhì)量濃度10%的牛血清白蛋白，每1ml膠體金溶液中加入15μl質(zhì)量濃度10%的牛血清白蛋白，4℃下15000轉(zhuǎn)/分離心40分鐘，棄上清，得沉淀，沉淀用PBS稀釋至原膠體金溶液體積的30%～40%，成膠體金標(biāo)記物；

（4）、固化膠體金標(biāo)記物：在載體玻璃纖維層（4）上吸附包被膠體金標(biāo)記物，干燥，將膠體金標(biāo)記物固化在載體玻璃纖維層上；

（5）、包被膜制備：取抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物，分別包被于硝酸纖維層（2）上，自上而下形成包被的一條抗鼠免疫球蛋白抗體的質(zhì)控線、一條阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的檢測(cè)線，其中，抗鼠免疫球蛋白抗體包被濃度為0.5～5mg/ml，阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包被濃度為0.05～2mg/ml；

（6）、切割：將包括吸附有膠體金標(biāo)記物的載體玻璃纖維層（4）、包被抗鼠免疫球蛋白抗體、阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物的硝酸纖維層（2）后的試紙條載體切割成長(zhǎng)條，即成本發(fā)明試紙條。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述的試紙條為長(zhǎng)?6.5～8.0?cm、寬?0.3～0.4?cm的長(zhǎng)方條。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述的步驟（2）中質(zhì)量濃度1%的檸檬酸三鈉溶液的加入量可為16～18ml、或17ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述的步驟（3）中單克隆抗體膠體金標(biāo)記物的加入量為4～8μg/ml、或6μg/ml。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿維菌素膠體金檢測(cè)試紙條的制備方法，其特征在于，所述的步驟（5）中抗鼠免疫球蛋白抗體包被濃度為1～4mg/ml、或3～4?mg/ml；阿維菌素蛋白質(zhì)偶聯(lián)物包被濃度為1～1.5mg/ml、或1.2～1.8mg/ml。