[發明專利]一組核苷酸序列及在伊氏李斯特菌鑒定中的應用在審
| 申請號： | 201410725837.2 | 申請日： | 2014-12-03 |
| 公開（公告）號： | CN104498487A | 公開（公告）日： | 2015-04-08 |
| 發明（設計）人： | 王毅;葉長蕓;王艷 | 申請（專利權）人： | 中國疾病預防控制中心傳染病預防控制所 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/68;C12Q1/04;C12R1/01 |
| 代理公司： | 北京市眾天律師事務所 11478 | 代理人： | 李新軍 |
| 地址： | 102206 *** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一組 核苷酸 序列 李斯特 鑒定 中的 應用 | ||
1.一種核苷酸序列組合，由SEQ?ID?NO:1-6組成。
2.權利要求1所述的核苷酸組合在伊氏李斯特菌鑒定中的應用。
3.一種用于檢測伊氏李斯特菌的方法，所述方法包括如下步驟：
(1)將待檢測樣本、序列如SEQ?ID?NO:1-2所示的一對外引物、序列如SEQ?ID?NO:3-4所示的一對內引物、序列如SEQ?ID?NO:5-6所示的一對環引物、dNTP、Bst?DNA聚合酶、MgSO4、甜菜堿以及環介導等溫擴增緩沖液加入到反應容器中；
(2)將步驟(1)所得的混合液放置于63℃恒溫環境中進行DNA擴增反應；
(3)檢測步驟(3)獲得的產物。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述MgSO4的濃度為4mM，所述甜菜堿的濃度為0.8mM。
5.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，步驟(1)中所述待檢測樣本為DNA提取物。
6.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，步驟(2)中所述的DNA擴增反應時間為60分鐘。
7.根據權利要求3或4所述的方法，其特征在于，步驟(3)所述的檢測方法可以是目測判讀、瓊脂糖凝膠電泳判讀、或者實時濁度儀判讀。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，在檢測前在反應體系加入熒光試劑，步驟(3)所述的檢測方法為目測判讀。
9.一種檢測伊氏李斯特菌的試劑盒，所述試劑盒包括：序列如SEQ?ID?NO:1-2所示的一對外引物、序列如SEQ?ID?NO:3-4所示的一對內引物、序列如SEQ?ID?NO:5-6所示的一對環引物、dNTP、Bst?DNA聚合酶、MgSO4、甜菜堿、環介導等溫擴增緩沖液。
10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述MgSO4的濃度為4mM，所述甜菜堿的濃度為0.8mM。
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