[發明專利]一種基于γ-聚谷氨酸接枝多巴胺@殼聚糖復合膠束的免疫傳感器的制備方法

有效

• 申請號: 201410721208.2
• 申請日: 2014-12-01
• 公開（公告）號: CN104407140A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 劉曉亞;許升;張榮莉;羅靜;張翠歌;趙鑫犇
• 申請（專利權）人: 江南大學
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N27/327
• 代理公司: 無錫華源專利事務所(普通合伙) 32228
• 代理人: 馮智文

1.一種基于γ-聚谷氨酸接枝多巴胺@殼聚糖復合膠束的免疫傳感器的制備方法，其特征在于大分子膠束的制備、大分子膠束修飾電極的制備、免疫傳感器的構建，具體步驟如下：

(1)大分子膠束的制備

將殼聚糖溶液逐滴加入到40～50倍其體積的γ-聚谷氨酸接枝多巴胺溶液中，以500～1000rpm的轉速攪拌，使殼聚糖與γ-聚谷氨酸接枝多巴胺溶液通過靜電作用自組裝形成大分子膠束，繼續以500～1000rpm的轉速速攪拌5h～12h，使膠束聚合物組裝完全；將所得大分子膠束溶液通過孔隙800nm的針式過濾器，得到粒徑均勻分布的大分子膠束溶液即γ-聚谷氨酸接枝多巴胺@殼聚糖復合膠束溶液；

(2)大分子膠束修飾電極的制備

將所述大分子膠束溶液通過滴涂、電泳沉積的方法修飾在傳感電極表面，形成粒子膜，室溫晾干，制得大分子膠束修飾電極；

所述電極為金電極、鉑電極、玻碳電極或ITO玻璃電極；

(3)免疫傳感器的構建

將制得的大分子膠束修飾電極浸入氯金酸水溶液中，通過恒電位還原氯金酸在電極表面修飾納米金粒子；再將納米金修飾的電極浸入含抗體的磷酸鹽緩沖溶液中與抗體結合；最后將結合抗體的電極浸入牛血清蛋白溶液中以封閉非特異性結合位點，即制得免疫傳感器。

2.根據權利要求1所述的免疫傳感器的制備方法，其特征在于所述步驟(1)中殼聚糖溶液的濃度0.5mg/mL～1.0mg/mL，溶劑為質量分數為1％～5％的醋酸水溶液或鹽酸水溶液；γ-聚谷氨酸接枝多巴胺溶液的濃度0.05mg/mL～0.5mg/mL，溶劑為去離子水或超純水。

3.根據權利要求1所述的免疫傳感器的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中電極在使用前需經預處理，預處理的方法為：

(1)拋光處理：電極依次用1.0μm、0.05μm的氧化鋁粉末在麂皮上拋光至鏡面，依次用無水乙醇、超純水、無水乙醇分別超聲3min清洗電極表面，氮氣吹干電極；

(2)將吹干的電極置于5mol/L的鐵氰化鉀溶液中，在-200mV～600mV范圍內進行循環伏安測試，使掃描峰電位差小于100mV，否則將電極重新進行拋光處理。

4.根據權利要求1所述的免疫傳感器的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中電泳沉積方法為將電極浸入大分子復合膠束溶液中，施加與復合膠束荷電相反的恒電位，使大分子復合膠束沉積在電極表面形成膠束粒子膜；修飾電極為工作電極，鉑絲電極為對電極，飽和甘汞電極為參比電極；電沉積工藝條件為：恒電位0.1V～10V，電沉積時間10s～600s。

5.根據權利要求1所述的免疫傳感器的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中滴涂方法為用微量進樣器吸取5～10μL復合膠束溶液滴涂于電極表面，室溫下自然干燥，形成粒子膜，制得大分子膠束修飾電極。

6.根據權利要求1所述的免疫傳感器的制備方法，其特征在于所述步驟(3)中構建免疫傳感器的具體步驟為：

(1)將大分子膠束修飾的電極浸入0.02mg/mL～0.2mg/mL的氯金酸水溶液中，通過恒電位還原氯金酸，在大分子膠束修飾電極表面生成均勻分散的納米金粒子；恒電位-0.1V～-2.0V，還原時間10s～300s；

(2)將步驟(1)所得的電極浸入含抗體的pH6.0～pH7.5的磷酸鹽緩沖液中，在4℃條件下浸泡12～24h后取出，制得表面吸附有抗體的修飾電極；

(3)再將步驟(2)所得表面吸附有抗體的修飾電極浸入5mg/mL～10mg/mL的牛血清蛋白溶液中，在37℃下孵育0.5h～2h以封閉非特異性吸附位點，制得所述免疫傳感器；

(4)將所制備的免疫傳感器浸入pH6.0～pH7.5的磷酸鹽緩沖液中，4℃以下保存備用。

7.根據權利要求6所述的免疫傳感器的制備方法，其特征在于所述步驟(2)中的抗體為癌胚抗體、甲胎蛋白抗體、卵巢癌相關抗體、乳腺癌相關抗原、胃腸癌相關抗體、血管內皮生長因子、人體絨毛膜促性腺激素、前列腺癌抗體或微囊海藻素抗體。