[發明專利]一種涼粉草與溪黃草的DNA鑒定方法

有效

• 申請號: 201410720751.0
• 申請日: 2014-12-02
• 公開（公告）號: CN104450905B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發明（設計）人: 陳士林;師玉華;孫偉;向麗;方廣宏;翁少全;李詞周;鄭榮波;黃曉丹;楊光;沈穎莉;彭紹忠
• 申請（專利權）人: 中國中醫科學院中藥研究所;廣州王老吉藥業股份有限公司;廣州王老吉大健康產業有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京戈程知識產權代理有限公司11314
• 代理人: 程偉

技術領域

本公開屬于中藥材來源品種鑒定技術領域；具體而言，本公開涉及ITS2序列用于鑒定涼粉草與溪黃草的方法。

背景技術

涼粉草藥材為唇形科植物涼粉草(Mesona chinensis Benth.)的干燥地上部分，又名仙人草、仙人凍、仙草等。主產于兩廣、浙江、江西等省。《本草求原》記錄涼粉草性澀、甘、寒，善暑熱、解藏府結熱毒，治酒風。現代研究表明涼粉草含涼粉草多糖、齊墩果酸、槲皮素及黃酮類等多種化學活性成分。具有抗腫瘤、抗炎、降血糖、護肝、解肝毒和增強機體免疫力等作用。同時涼粉草為藥食同源藥材，常被用于涼粉、涼茶、龜苓膏等消暑品中。

溪黃草藥材為唇形科線紋香茶菜(Isodon striatus(Benth.)Kudo)(《中國植物志》中更名為Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don)H.Hara)或溪黃草(Isodon serra(Maxim.)Kudo)的干燥地上部分。該藥材有清熱利濕、退黃、保肝、利膽等作用，也被廣泛應用。

涼粉草與溪黃草藥材在我國尤其是嶺南地區為常用中草藥。兩者的基原植物同為唇形科且形態相似，不易識別。因此，有些地區常出現溪黃草藥材被當作涼粉草藥材混用的現象。然而，溪黃草與涼粉草藥材藥性、功效不同，兩者混淆使用給臨床用藥造成了潛在威脅。因為兩種藥材的藥用部位均為干燥的全草，依賴傳統的形態、顯微方法無法準確地鑒定。

現有技術中，有研究人員采用HPLC色譜建立了涼粉草的特征指紋圖譜，為涼粉草的鑒定提供了依據(丁婕等人，涼粉草的特征指紋圖譜研究.中草藥,2012年11期)。但是，并未見到應用該方法針對藥材涼粉草與其混偽品的鑒定研究，而迄今為止亦未發現任何藥材涼粉草與溪黃草的鑒定方法的報道。

因此，亟待尋找一種準確、高效、快速的方法來鑒定藥材涼粉草與溪黃草。

發明內容

鑒于上述現有技術中的缺陷，本公開提供一種鑒定藥材涼粉草或其基原植物的方法，方法包括如下步驟：

1)提供藥材樣本或植物樣本；

2)提取樣本中的DNA；

3)對步驟2)提取的DNA進行PCR擴增，得到擴增產物，其中所述擴增產物包含完整的ITS2基因間隔區；

4)對步驟3)的擴增產物進行測序，獲得核苷酸序列；

5)判斷擴增產物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No.1所示序列；

6)若存在，則鑒定所述藥材為藥材涼粉草，所述植物為藥材涼粉草的基原植物。

在一個具體的實施方式中，提供一種鑒定藥材涼粉草或其基原植物的方法，方法包括如下步驟：

1)提供藥材樣本或植物樣本；

2)提取樣本中的基因組DNA；

3)采用如SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的引物對，對步驟2)提取的基因組DNA進行PCR擴增，得到擴增產物，其中所述擴增產物包含完整的ITS2基因間隔區；

4)對步驟3)的擴增產物進行測序，獲得核苷酸序列；

5)去除核苷酸序列兩端的5.8S和26S基因區序列，獲得ITS2基因間隔區的核苷酸序列；

6)將ITS2基因間隔區的核苷酸序列與SEQ ID No.1所示序列進行比對；

7)若相同，則鑒定所述藥材為藥材涼粉草，所述植物為藥材涼粉草的基原植物。

另一方面，本公開提供一種鑒定藥材溪黃草或其基原植物的方法，方法包括如下步驟：

1)提供藥材樣本或植物樣本；

2)提取樣本中的DNA；

3)對步驟2)提取的DNA進行PCR擴增，得到擴增產物，其中所述擴增產物包含完整的ITS2基因間隔區；

4)對步驟3)的擴增產物進行測序，獲得核苷酸序列；

5)判斷擴增產物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No.2或3所示的序列；

6)若存在SEQ ID No.2所示的序列，則鑒定所述藥材為藥材溪黃草，所述植物為藥材溪黃草的基原植物線紋香茶菜Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don)H.Hara；或者

若存在SEQ ID No.3所示的序列，則鑒定所述藥材為藥材溪黃草，所述植物為藥材溪黃草的基原植物溪黃草Isodon serra(Maxim.)Kudo。

在一個具體的實施方式中，提供一種鑒定藥材溪黃草或其基原植物的方法，方法包括如下步驟：