[發(fā)明專利]一種涼粉草與溪黃草的DNA鑒定方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410720751.0
• 申請(qǐng)日: 2014-12-02
• 公開（公告）號(hào): CN104450905B
• 公開（公告）日: 2018-01-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳士林;師玉華;孫偉;向麗;方廣宏;翁少全;李詞周;鄭榮波;黃曉丹;楊光;沈穎莉;彭紹忠
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)中醫(yī)科學(xué)院中藥研究所;廣州王老吉藥業(yè)股份有限公司;廣州王老吉大健康產(chǎn)業(yè)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68
• 代理公司: 北京戈程知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11314
• 代理人: 程偉

1.一種鑒定藥材溪黃草或其基原植物的方法，方法包括如下步驟：

1)提供藥材樣本或植物樣本；

2)提取樣本中的DNA；

3)對(duì)步驟2)提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物，其中所述擴(kuò)增產(chǎn)物包含完整的ITS2基因間隔區(qū)；

4)對(duì)步驟3)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，獲得核苷酸序列；

5)判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No.2或SEQ ID No.3所示的序列；

6)存在SEQ ID No.2所示的序列，則鑒定所述藥材為藥材溪黃草，所述植物為藥材溪黃草的基原植物線紋香茶菜(Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don)H.Hara)；或者

存在SEQ ID No.3所示的序列，則鑒定所述藥材為藥材溪黃草，所述植物為藥材溪黃草的基原植物溪黃草(Isodon serra(Maxim.)Kudo)。

2.一種鑒定藥材涼粉草中是否摻雜有藥材溪黃草的方法；或者一種鑒定藥材涼粉草基原植物中是否摻雜有藥材溪黃草基原植物的方法，方法包括如下步驟：

1)提供藥材樣本或植物樣本；

2)提取樣本中的DNA；

3)對(duì)步驟2)提取的DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到擴(kuò)增產(chǎn)物，其中所述擴(kuò)增產(chǎn)物包含完整的ITS2基因間隔區(qū)；

4)對(duì)步驟3)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，獲得核苷酸序列；

5)判斷擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列中是否存在SEQ ID No.2和/或3所示的序列；

6)擴(kuò)增產(chǎn)物的核苷酸序列中存在SEQ ID No.2和/或SEQ ID No.3所示序列，則鑒定所述藥材涼粉草中摻雜有藥材溪黃草，所述藥材涼粉草基原植物中摻雜有藥材溪黃草基原植物。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其中所述的DNA是基因組DNA。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中所述擴(kuò)增是通過SEQ ID No.4和SEQ ID No.5所示的引物對(duì)進(jìn)行的。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，步驟4)之后還包括如下步驟：

去除擴(kuò)增產(chǎn)物核苷酸序列兩端的5.8S和26S基因區(qū)序列。

6.ITS2基因間隔區(qū)在鑒定藥材溪黃草或其基原植物中的用途，

所述藥材溪黃草的基原植物是線紋香茶菜(Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don)H.Har)、或溪黃草(Isodon serra(Maxim.)Kudo)，

其中所述ITS2基因間隔區(qū)的核苷酸序列是SEQ ID No.2或SEQ ID No.3。

7.ITS2基因間隔區(qū)在區(qū)分藥材涼粉草和藥材溪黃草中的用途；或者ITS2基因間隔區(qū)在區(qū)分藥材涼粉草基原植物和藥材溪黃草基原植物中的用途，

其中所述藥材溪黃草的基原植物是指線紋香茶菜(Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don)H.Har)、或溪黃草(Isodon serra(Maxim.)Kudo)；

所述ITS2基因間隔區(qū)的核苷酸序列選自：SEQ ID No.1、SEQ ID No.2和SEQ ID No.3。

8.一種用于區(qū)分涼粉草和溪黃草的芯片，其上固定有特異于以下序列的探針：

SEQ ID No.1、以及

SEQ ID No.2、和/或

SEQ ID No.3。

9.一種用于鑒定溪黃草的芯片，其上固定有特異于選自以下至少一種序列的探針：SEQ ID No.2和SEQ ID No.3。

10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的芯片，其中所述溪黃草是指線紋香茶菜(Isodon lophanthoides(Buchanan-Hamilton ex D.Don)H.Har)、或溪黃草(Isodon serra(Maxim.)Kudo)。