[發明專利]一種治療HPV16和HPV18病毒的融合蛋白及其制備方法

在審

• 申請號: 201410720308.3
• 申請日: 2014-12-01
• 公開（公告）號: CN104387475A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發明（設計）人: 覃啟紅;溫華杰;黃龍
• 申請（專利權）人: 覃啟紅
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;C12N15/70;A61P31/20
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

1.一種治療HPV?16和HPV?18病毒的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白TALEs-ScPvuII-HPV18基因序列如SEQ?ID?NO：1所示；所述的融合蛋白TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3的基因序列如SEQ?ID?NO：2，SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示。

2.根據權利要求1所述的治療HPV?16和HPV?18病毒的融合蛋白，其特征在于，所述的融合蛋白依次由下述方法制得：

1)靶位點的篩選

以HPV16的E6基因和E7基因，HPV18的E7基因為靶基因，TALEs識別的位點加上限制性內切酶ScPvuII的識別位點構成TALEs-ScPvuII的靶位點；

其中：

HPV18的E7基因上的靶基因TALEs-ScPvuII-HPV18的靶位點為：TCAGCAGACGACCTTCGAGCATTCCAGCAGCTG；

HPV16的E6和E7基因TALEs-ScPvuII-HPV16的靶位點為：

TCAAGAACACGTAGAGAAACCCAGCTG，

TAGGTGTATCTCCATGCATGATTACAGCTG，

TGGGCTCTGTCCGGTTCTGCTTGTCCAGCTG；

2)PET16b-TALEs-ScPvuII-HPV18和PET16b-TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3原核表達載體的構建

將TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3克隆到原核表達載體PET-16b的NdeI和BamHI位點，獲得TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3原核表達載體，最后同時轉化到大腸桿菌BL21中；

3)TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白的表達與純化

將帶有重組質粒TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3的大腸桿菌BL21菌種擴大培養，在12-18℃經IPTG過夜誘導，分別收集所得到的TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白菌體，經過高壓破碎后離心獲得可溶性的上清，進行Ni柱親和層析，待目的蛋白與Ni柱結合之后，先用漂洗液洗滌，再用洗脫緩沖液，利用脫鹽柱將洗脫組分中的高鹽緩沖液置換成含有20％甘油的PBS溶液，最后進行SDS-PAGE的檢測，即為純化的TALEs-ScPvuII-HPV18和TALEs-ScPvuII-HPV16_1-3蛋白。