[發明專利]應用液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素的方法有效
| 申請號: | 201410719313.2 | 申請日: | 2014-12-01 |
| 公開(公告)號: | CN104407085A | 公開(公告)日: | 2015-03-11 |
| 發明(設計)人: | 張素青;陳永平;李春青;葉紅梅;高麗娜;李連慶;時文博;王秀芹;王德興;王寶峰;馬丹;王娟娟;易偉;李兆千;張玲 | 申請(專利權)人: | 農業部漁業環境及水產品質量監督檢驗測試中心(天津) |
| 主分類號: | G01N30/88 | 分類號: | G01N30/88 |
| 代理公司: | 天津盛理知識產權代理有限公司 12209 | 代理人: | 韓奎勇 |
| 地址: | 300221 *** | 國省代碼: | 天津;12 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 應用 聯用 測定 淡水 池塘 底泥中 氯霉素 方法 | ||
技術領域
本發明屬于分析化學、生態環境安全技術領域,特別是一種應用液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素的方法。
背景技術
氯霉素(CAP)是一種廣譜抗生素,對需氧、厭氧菌以及衣原體、支原體、立克次體等均有效。由于價格便宜且效果顯著,常被作為藥物用于畜禽及水產品的疾病治療和預防。但是,氯霉素存在嚴重的毒副作用,能抑制人體骨髓造血功能,容易造成再生障礙性貧血、粒狀白細胞缺乏癥和灰嬰綜合征等。因此,為保障動物源食品安全,確保該藥不對人類帶來危害,世界各國都對其做出了嚴格規定,嚴禁氯霉素在食用動物上使用,歐盟規定動物源食品中氯霉素殘留的最低要求執行限為(MRPL)0.3μg/kg,我國農業部235號公告中把氯霉素列為了禁用藥物。
由于傳統的水產養殖模式,導致氯霉素已經被廣泛應用,盡管現在水產養殖中違禁使用情況很少了,但其已對環境造成了嚴重污染,尤其是氯霉素在表層沉積物中富集,當受污染的淡水池塘進行再次養殖生產時,底泥中的禁用藥物氯霉素會不斷向水體進行緩慢釋放,成為其二次污染的主要來源,因此評估養殖池塘底泥中的氯霉素藥物殘留狀況,建立相應的檢測方法,對于水產品中氯霉素污染來源的排查具有積極的意義。
經過中國學術期刊網絡出版總庫、中文科技期刊數據庫、中國學術會議論文全文數據庫、中國學位論文全文數據庫、國家科技成果網、中國專利數據庫、中國科技項目創新成果鑒定意見數據庫、中國優秀碩士學位論文全文數據庫、中國博士學位論文全文數據庫、中國重要報紙全文數據庫、http://www.baidu.com等文獻檢索及國外的相關資料檢索,目前,淡水池塘中底泥中的氯霉素檢測方法,只報道了應用氣相色譜儀法測定淡水池塘中底泥中的氯霉素,而液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素方法未見報道。
液質–質聯用技術(LC–MS/MS)具有快速、靈敏度高、專一性好、不受噪聲干擾等特點,尤其是通過多反應監測模式(MRM)能進一步提高檢測的靈敏度和選擇性,大大降低了檢測限并很大程度上減少了假陽性的出現。
由于淡水養殖池塘底泥中的成份復雜,各種雜質多,對分析干擾大,氣液相色譜儀檢測方法需要進行衍生化,對樣品的凈化要求較高,整個操作步驟繁瑣、耗時長,氣相色譜儀器檢測易形成相似峰干擾,熱穩定差,不利于準確定性和定量分析,因此研制出干擾小,穩定性高,數據準確的檢測方法十分必要。
發明內容
本發明的目的是針對檢測底泥中氯霉素現有技術的不足,而提出一種對淡水池塘底泥中氯霉素樣品采集、提取、濃縮,優化了前處理過程,應用液質-質聯用儀,能夠快速準確檢測出淡水池塘底泥中殘存的痕量氯霉素的檢測方法。
本發明解決其技術問題是采取以下技術方案實現的:
一種應用液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素的方法,包括步驟如下:
(1)養殖池塘底泥樣品采集,用采泥器取表層沉積物,放在廣口瓶中在-18℃冰箱保存;
(2)樣品的提取,稱取樣品5.00g置50ml離心管中,加入2ml水潤濕,加入500μl濃度為10.0ng/ml的氯霉素內標溶液、5ml乙腈及4%氯化鈉溶液5ml,漩渦振蕩2min,超聲萃取20min后,靜置10min,用轉速為15000r/min的離心機離心10min,提取上清液至于另一50ml離心管中;
(3)重復上述步驟(2)的提取過程,合并兩次提取液,在合并的提取液中加入正己烷5ml,漩渦振蕩2min,用轉速為5000r/min的離心機離心10min,棄去正己烷層溶液,重復一次,得提取液;
(4)在上述(3)步所得提取液中加入水飽和乙酸乙酯溶液5ml,漩渦振蕩2min,用轉速為5000r/min的離心機離心10min,上層液轉移到15ml離心管中,重復提取1次,將兩次所得上層液合并;
(5)將上述(4)步所得提取液用氮氣吹干,用乙腈-水(5+95)溶液3ml溶解氮氣吹干后殘留物得備用液;
(6)將固相萃取柱依次用甲醇10ml,水10ml預洗,然后取上述備用液過柱,用水5ml洗柱,用5ml甲醇水(50+50)溶液洗脫,以1ml/min的速度將樣品洗脫入15ml離心管中;
(7)將上述洗脫液中加入水飽和乙酸乙酯溶液5ml,渦旋振蕩2min,5000r/min,離心5min,取上層液,重復提取1次,合并提取液氮氣吹干,得吹干殘留物;
(8)用1mL甲醇水(50+50)溶液溶解上步殘留物,旋渦后經0.22μm微孔濾膜過濾后用液質-質聯用儀上機測定。
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