[發明專利]應用液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素的方法

有效

• 申請號: 201410719313.2
• 申請日: 2014-12-01
• 公開（公告）號: CN104407085A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 張素青;陳永平;李春青;葉紅梅;高麗娜;李連慶;時文博;王秀芹;王德興;王寶峰;馬丹;王娟娟;易偉;李兆千;張玲
• 申請（專利權）人: 農業部漁業環境及水產品質量監督檢驗測試中心（天津）
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88
• 代理公司: 天津盛理知識產權代理有限公司 12209
• 代理人: 韓奎勇

技術領域

本發明屬于分析化學、生態環境安全技術領域，特別是一種應用液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素的方法。

背景技術

氯霉素(CAP)是一種廣譜抗生素，對需氧、厭氧菌以及衣原體、支原體、立克次體等均有效。由于價格便宜且效果顯著，常被作為藥物用于畜禽及水產品的疾病治療和預防。但是，氯霉素存在嚴重的毒副作用，能抑制人體骨髓造血功能，容易造成再生障礙性貧血、粒狀白細胞缺乏癥和灰嬰綜合征等。因此，為保障動物源食品安全，確保該藥不對人類帶來危害，世界各國都對其做出了嚴格規定，嚴禁氯霉素在食用動物上使用，歐盟規定動物源食品中氯霉素殘留的最低要求執行限為(MRPL)0.3μg/kg，我國農業部235號公告中把氯霉素列為了禁用藥物。

由于傳統的水產養殖模式，導致氯霉素已經被廣泛應用，盡管現在水產養殖中違禁使用情況很少了，但其已對環境造成了嚴重污染，尤其是氯霉素在表層沉積物中富集，當受污染的淡水池塘進行再次養殖生產時，底泥中的禁用藥物氯霉素會不斷向水體進行緩慢釋放，成為其二次污染的主要來源，因此評估養殖池塘底泥中的氯霉素藥物殘留狀況，建立相應的檢測方法，對于水產品中氯霉素污染來源的排查具有積極的意義。

經過中國學術期刊網絡出版總庫、中文科技期刊數據庫、中國學術會議論文全文數據庫、中國學位論文全文數據庫、國家科技成果網、中國專利數據庫、中國科技項目創新成果鑒定意見數據庫、中國優秀碩士學位論文全文數據庫、中國博士學位論文全文數據庫、中國重要報紙全文數據庫、http://www.baidu.com等文獻檢索及國外的相關資料檢索，目前，淡水池塘中底泥中的氯霉素檢測方法，只報道了應用氣相色譜儀法測定淡水池塘中底泥中的氯霉素，而液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素方法未見報道。

液質–質聯用技術(LC–MS/MS)具有快速、靈敏度高、專一性好、不受噪聲干擾等特點，尤其是通過多反應監測模式(MRM)能進一步提高檢測的靈敏度和選擇性，大大降低了檢測限并很大程度上減少了假陽性的出現。

由于淡水養殖池塘底泥中的成份復雜，各種雜質多，對分析干擾大，氣液相色譜儀檢測方法需要進行衍生化，對樣品的凈化要求較高，整個操作步驟繁瑣、耗時長，氣相色譜儀器檢測易形成相似峰干擾，熱穩定差，不利于準確定性和定量分析，因此研制出干擾小，穩定性高，數據準確的檢測方法十分必要。

發明內容

本發明的目的是針對檢測底泥中氯霉素現有技術的不足，而提出一種對淡水池塘底泥中氯霉素樣品采集、提取、濃縮，優化了前處理過程，應用液質-質聯用儀，能夠快速準確檢測出淡水池塘底泥中殘存的痕量氯霉素的檢測方法。

本發明解決其技術問題是采取以下技術方案實現的：

一種應用液質-質聯用儀測定淡水池塘底泥中氯霉素的方法，包括步驟如下：

(1)養殖池塘底泥樣品采集，用采泥器取表層沉積物，放在廣口瓶中在-18℃冰箱保存；

(2)樣品的提取，稱取樣品5.00g置50ml離心管中，加入2ml水潤濕，加入500μl濃度為10.0ng/ml的氯霉素內標溶液、5ml乙腈及4％氯化鈉溶液5ml，漩渦振蕩2min，超聲萃取20min后，靜置10min，用轉速為15000r/min的離心機離心10min，提取上清液至于另一50ml離心管中；

(3)重復上述步驟(2)的提取過程，合并兩次提取液，在合并的提取液中加入正己烷5ml，漩渦振蕩2min，用轉速為5000r/min的離心機離心10min，棄去正己烷層溶液，重復一次，得提取液；

(4)在上述(3)步所得提取液中加入水飽和乙酸乙酯溶液5ml，漩渦振蕩2min，用轉速為5000r/min的離心機離心10min，上層液轉移到15ml離心管中，重復提取1次，將兩次所得上層液合并；

(5)將上述(4)步所得提取液用氮氣吹干，用乙腈－水(5+95)溶液3ml溶解氮氣吹干后殘留物得備用液；

(6)將固相萃取柱依次用甲醇10ml，水10ml預洗，然后取上述備用液過柱，用水5ml洗柱，用5ml甲醇水(50+50)溶液洗脫，以1ml/min的速度將樣品洗脫入15ml離心管中；

(7)將上述洗脫液中加入水飽和乙酸乙酯溶液5ml，渦旋振蕩2min，5000r/min，離心5min，取上層液，重復提取1次，合并提取液氮氣吹干，得吹干殘留物；

(8)用1mL甲醇水(50+50)溶液溶解上步殘留物，旋渦后經0.22μm微孔濾膜過濾后用液質-質聯用儀上機測定。