[發(fā)明專利]西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2的連鎖分子標記及其應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410717961.4 | 申請日： | 2014-12-01 |
| 公開（公告）號： | CN104498485A | 公開（公告）日： | 2015-04-08 |
| 發(fā)明（設計）人： | 張國裕;李海真;張帆;賈長才;姜立綱 | 申請（專利權(quán)）人： | 北京市農(nóng)林科學院 |
| 主分類號： | C12N15/11 | 分類號： | C12N15/11;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 北京國林貿(mào)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11001 | 代理人： | 李桂玲;許文娟 |
| 地址： | 100097北京市海淀*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 西葫蘆 zymv 顯性 抗病 基因 連鎖 分子 標記 及其 應用 | ||
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種與西葫蘆（Cucurbitapepo?L.）小西葫蘆黃化花葉病毒病（ZYMV）顯性抗病基因ZYMV-2連鎖的SSR分子標記，以及該標記在檢測抗病植株中的應用。
背景技術(shù)
西葫蘆是全球范圍內(nèi)普遍栽植的重要蔬菜之一，在我國的栽培面積逐年增加，特別是近年來保護地設施栽培發(fā)展迅速，已成為繼黃瓜之后的第二大栽培作物。對農(nóng)民增收、農(nóng)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整以及豐富人民的菜籃子有著重要意義。
小西葫蘆黃化花葉病毒病（zucchini?yellow?mosaic?virus,?ZYMV）是目前危害西葫蘆等葫蘆科作物生產(chǎn)的主要病害之一。世界范圍內(nèi)ZYMV傳播蔓延迅速，近年來在我國西葫蘆生產(chǎn)和制種中的危害日趨嚴重和廣泛（劉衛(wèi)榮等，2008）。植株感染ZYMV后會產(chǎn)生花葉、植株矮化畸形，果實表面瘤狀凸凹不平、果肉僵硬且味苦澀等癥狀，使果實失去商品價值，導致產(chǎn)量損失達60%以上，嚴重者甚至絕產(chǎn)（Zechmann?et?al.，2003；劉衛(wèi)榮等，2008）。
目前還沒有防治該病毒病的有效試劑和措施，培育和推廣抗病品種是減少ZYMV危害的最經(jīng)濟、安全、有效措施。但目前，由于抗病基因主要來源于野生南瓜材料，且存在通過人工接種病毒進行抗病性狀檢測繁瑣、性狀鑒定準確性差等問題，導致抗性性狀轉(zhuǎn)育困難，抗病育種效率低、周期長，生產(chǎn)中抗病品種少，不能滿足生產(chǎn)需要。緊密連鎖的分子標記可以加速抗病育種進程及提高選擇的準確性，是分子標記輔助選擇育種的必要條件。但目前國內(nèi)外還沒有與西葫蘆ZYMV抗病基因緊密連鎖分子標記的研究報道。因此，開發(fā)與葫蘆ZYMV抗病基因緊密連鎖的分子標記，對于提高西葫蘆抗病育種效率，拓展抗病基因應用范圍，保障西葫蘆產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展具有重要的實際應用價值。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有育種技術(shù)的上述不足，提供西葫蘆ZYMV病毒病顯性抗基因ZYMV-2的SSR分子標記及其應用。
本發(fā)明的目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
西葫蘆ZYMV抗病基因ZYMV-2的分子標記，所述分子標記ZY-126；
所述的分子標記ZY-126：
左端引物序列為SEQ?ID?NO.?1，
右端引物序列為SEQ?ID?NO.?2，
擴增產(chǎn)物為137?bp，此分子標記來自西葫蘆自交系BS6染色體，為共顯性分子標記，利用Mapmaker/EXP?3.0測得與抗病基因ZYMV-2的遺傳距離為0.7?cM。
本發(fā)明的另一目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
所述的與西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2緊密連鎖的SSR分子標記的獲得方法，其特征在于，包括如下步驟：
所述SSR分子標記是應用SSR-BSA技術(shù)采用下述方法得到的：以西葫蘆自交系BS11和BS6分別作為感病和抗病親本配制F2代分離群體，用584對SSR引物篩選與西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2連鎖的分子標記，得到一個共顯性分子標記，即ZY126，與抗病基因ZYMV-2的遺傳連鎖距離為0.7?cM。
本發(fā)明的另一目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
所述的分子標記ZY-126在西葫蘆種質(zhì)資源抗ZYMV病毒病基因的鑒定和轉(zhuǎn)移中的應用。
西葫蘆ZYMV抗病基因ZYMV-2的分子標記方法，用以下一對分子標記引物PCR擴增待檢測西葫蘆基因組DNA，并檢測擴增產(chǎn)物：
分子標記ZY-126：
左端引物序列為SEQ?ID?NO.?1，
右端引物序列為SEQ?ID?NO.?2，
如果用引物ZY-126能夠擴增出137?bp的擴增片段，則標志著待檢西葫蘆存在抗ZYMV病毒病基因ZYMV-2。
本發(fā)明的另一目的可通過如下技術(shù)方案實現(xiàn)：
一種篩選抗ZYMV病毒病西葫蘆的方法，用權(quán)利要求1所述的引物對擴增待檢西葫蘆基因組DNA，如果用引物ZY-126能夠擴增出137?bp的擴增片段，則標志該待檢西葫蘆為存在ZYMV-2抗病基因的抗ZYMV病毒病西葫蘆。
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本發(fā)明的有益效果為：
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