[發(fā)明專利]西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2的連鎖分子標(biāo)記及其應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410717961.4
• 申請日: 2014-12-01
• 公開（公告）號: CN104498485A
• 公開（公告）日: 2015-04-08
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張國裕;李海真;張帆;賈長才;姜立綱
• 申請（專利權(quán)）人: 北京市農(nóng)林科學(xué)院
• 主分類號: C12N15/11
• 分類號: C12N15/11;C12Q1/68
• 代理公司: 北京國林貿(mào)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司11001
• 代理人: 李桂玲;許文娟

1.與西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記，其特征在于，所述的分子標(biāo)記為ZY-126，其具有序列表中SEQ?ID?NO.?1和SEQ?ID?NO.?2所述的DNA序列。

2.一種如權(quán)利要求1所述的與西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2緊密連鎖的SSR分子標(biāo)記的獲得方法，其特征在于，包括如下步驟：

所述SSR分子標(biāo)記是應(yīng)用SSR-BSA技術(shù)采用下述方法得到的：以西葫蘆自交系BS11和BS6分別作為感病和抗病親本配制F₂代分離群體，用584對SSR引物篩選與西葫蘆ZYMV顯性抗病基因ZYMV-2連鎖的分子標(biāo)記，得到一個共顯性分子標(biāo)記，即ZY126，與抗病基因ZYMV-2的遺傳連鎖距離為0.7?cM。

3.如權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記在對西葫蘆種質(zhì)資源ZYMV抗病基因的鑒定和轉(zhuǎn)移中的應(yīng)用。

4.一種檢測西葫蘆ZYMV抗病基因ZYMV-2的分子標(biāo)記方法，其特征在于，用以下的一對分子標(biāo)記引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增待檢測西葫蘆基因組DNA，并檢測擴(kuò)增產(chǎn)物：

分子標(biāo)記ZY-126：

左端引物序列為SEQ?ID?NO.?1，

右端引物序列為SEQ?ID?NO.?2，

用所述的分子標(biāo)記ZY-126能夠擴(kuò)增出137?bp的擴(kuò)增片段，則標(biāo)志著待檢測西葫蘆存在抗ZYMV的基因ZYMV-2。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測西葫蘆ZYMV抗病基因ZYMV-2的分子標(biāo)記方法，其特征在于，所述的PCR反應(yīng)體積為15微升，其中10×buffer?1.5微升，2.5mM?dNTPs?0.3微升，Tag酶0.2微升，10?μM引物各0.3微升，模版DNA?30?ng，加ddH₂O至15微升。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的西葫蘆ZYMV抗病基因ZYMV-2的分子標(biāo)記方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)的條件為：DNA?95℃預(yù)變性3min后，94℃變性?30s，55℃退火?30s，72℃延伸30s，循環(huán)35次，最后72℃延伸10min。

7.一種篩選抗ZYMV病毒病西葫蘆的方法，其特征在于，用權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記對擴(kuò)增待檢西葫蘆基因組DNA，用所述的分子標(biāo)記ZY-126能夠擴(kuò)增出137?bp的擴(kuò)增片段，則標(biāo)志該待檢西葫蘆為存在ZYMV-2抗病基因的抗ZYMV病毒病西葫蘆。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的篩選抗ZYMV病毒病西葫蘆的方法，其特征在于，所述的PCR反應(yīng)體積為15微升，其中10×buffer?1.5微升，2.5mM?dNTPs?0.3微升，Tag酶0.2微升，10?μM引物各0.3微升，模版DNA?30?ng，加ddH₂O至15微升。

9.根據(jù)權(quán)利要求7所述的篩選抗ZYMV病毒病西葫蘆的方法，其特征在于，所述PCR反應(yīng)的條件為：DNA?95℃預(yù)變性3min后，94℃變性?30s，55℃退火?30s，72℃延伸30s，循環(huán)35次，最后72℃延伸10min。