[發(fā)明專利]一種強(qiáng)穩(wěn)定性液體酸性果膠酶的制備方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410713802.7
• 申請(qǐng)日: 2014-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN104450660A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 邵素英
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 邵素英
• 主分類號(hào): C12N9/96
• 分類號(hào): C12N9/96;C12N9/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及液體酸性果膠酶的制備方法，具體涉及一種強(qiáng)穩(wěn)定性液體酸性果膠酶的制備方法。

背景技術(shù)

液體酶制劑是一種使用方便，綠色環(huán)保，生物降解性良好的原料。專一的催化特性及溫和的反應(yīng)條件，在工業(yè)界得到越來越多的使用和重視。在使用方面液體酶制劑具有以下優(yōu)點(diǎn)：1)液體酶制劑以分子或微粒狀態(tài)分散在底物中，分散度大，吸收快，能較迅速地發(fā)生酶解反應(yīng)，酶活性高；2)易于分劑量，容易復(fù)配和二次加工，使用方便；3)有利于提高酶制劑的利用率，4)直接使用，無須溶解和活化；5)純度高、雜質(zhì)含量低；6)生產(chǎn)過程短、成本低；7)生產(chǎn)加工和使用過程中不會(huì)造成粉塵污染，有利于保護(hù)環(huán)境；但是，液體酶制劑體積較大，攜帶、運(yùn)輸、貯存都不方便，酶活性容易受到高溫、冷凍、光照、酸堿性、氧化、濕度等貯存環(huán)境的影響而顯著降低，并且因?yàn)橐后w酶制劑的水分活度較高，很容易受到微生物的污染而失活。因此，液體酶制劑的應(yīng)用受到限制，最主要的原因就是其穩(wěn)定性較差，包括生物穩(wěn)定性和物理、化學(xué)穩(wěn)定性。

果膠酶(pectinases)是一大類可分解植物細(xì)胞壁組分果膠質(zhì)的酶系總稱，從分解方式上可以將果膠酶分為果膠水解酶和果膠裂解酶，前者主要包括原果膠酶(PPase)、果膠酯酶(PE)、低聚半乳糖醛酸水解酶、聚甲基半乳糖醛酸酶(PMG)、聚半乳糖醛酸酶(PG)；后者主要包括聚半乳糖醛酸裂解酶(PGL)和聚甲基半乳糖醛酸裂解酶(PMGL)。

目前對(duì)于果膠酶的研究已有大量的文獻(xiàn)報(bào)道，其中研究時(shí)間較長的酸性果膠酶主要用于果膠組分的提取和果酒果汁的澄清，堿性果膠酶在制漿漂白，棉織物處理工藝中的應(yīng)用取得了一定進(jìn)展，特別是在麻類纖維的脫膠上的應(yīng)用研究日趨增多。無論是酸性果膠酶還是堿性果膠酶，其研究工作主要停留在菌種篩選及對(duì)酶學(xué)性質(zhì)的研究，最終目的是為果膠酶提供一個(gè)良好的、寬廣的應(yīng)用空間，但在果膠酶儲(chǔ)存穩(wěn)定性方面研究的較少。

目前，市場(chǎng)上的酸性果膠酶制劑主要有液體制劑、粉劑和顆粒制劑三種劑型。其中，液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快，保質(zhì)期短，難于商品化，極大地限制了液體酸性果膠酶的工業(yè)產(chǎn)業(yè)化應(yīng)用，應(yīng)用效率較低，成本升高。現(xiàn)有技術(shù)中，為了保證酸性果膠酶制劑的微生物指標(biāo)在貨架期達(dá)到食品級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，液體酸性果膠酶制劑主要通過添加防腐劑(山梨酸鉀、苯甲酸鈉等)和冷鏈運(yùn)輸保藏來滿足要求。很多果汁生產(chǎn)企業(yè)對(duì)食品添加劑的限量要求越來越嚴(yán)格，尤其是出口果汁加工企業(yè)，一些常用的防腐劑品種，如苯甲酸鈉，甚至被規(guī)定不得檢出?，F(xiàn)有產(chǎn)品中若不添加防腐劑，即使在冷鏈運(yùn)輸條件下，也會(huì)發(fā)生細(xì)菌污染等問題。

中國專利CN?101684462?B公開了一種酸性果膠酶液體制劑的生產(chǎn)方法，以蘋果渣為誘導(dǎo)物，以黑曲霉為菌種，經(jīng)過發(fā)酵、浸提、固液分離、去渣澄清、乙醇沉淀、固液分離、復(fù)溶工序制得液體酸性果膠酶酶制劑，解決了現(xiàn)有技術(shù)液體酸性果膠酶在常溫下保存酶活損失快、保質(zhì)期短的問題。上述公開專利在制備過程用到氧化鋁和山梨酸鉀等化學(xué)物質(zhì)，存在較大的食品安全隱患，且制備工藝復(fù)雜，同時(shí)沒考慮液體酸性果膠酶非生物穩(wěn)定性的問題。中國專利CN?101857857?A公開了一種食品級(jí)酸性果膠酶制劑的制備方法，其內(nèi)容包括：將發(fā)酵后獲得的酸性果膠酶液，降溫至10-20℃，然后進(jìn)行板框壓濾、微濾、超濾，調(diào)節(jié)pH值后，經(jīng)終端過濾進(jìn)行無菌灌裝。應(yīng)用本發(fā)明的方法制備的酸性果膠酶制劑，在不加防腐劑的情況下，仍然能夠保證酸性果膠酶制劑中細(xì)菌的生長緩慢。本發(fā)明通過控制整個(gè)制過程的溫度和降低制劑中的營養(yǎng)源殘量，應(yīng)用可控的無菌包裝技術(shù)，可以在不加防腐劑的情況下很好的保證酶制劑產(chǎn)品質(zhì)量及衛(wèi)生指標(biāo)。上述公開的專利采用10-20℃低溫和4.0-5.5的pH值不能很好的抑制過程污染的雜菌在儲(chǔ)存期間的生長和繁殖，并且浪費(fèi)冷源和原料，同時(shí)也沒考慮液體酸性果膠酶非生物穩(wěn)定性的問題。

因此，制備一種穩(wěn)定性強(qiáng)的液體酸性果膠酶以拓展其應(yīng)用領(lǐng)域和效率很重要，是酸性果膠酶研究的最重要、最具有現(xiàn)實(shí)意義的方向。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所解決的技術(shù)問題是克服現(xiàn)有液體酸性果膠酶的缺陷，無須添加化學(xué)防腐劑，無須低溫處理，在常溫下對(duì)發(fā)酵粗酶液和調(diào)配濃縮液采用高壓脈沖電場(chǎng)處理，并在調(diào)配過程添加果膠分解物、中草藥提取物、改性膳食纖維等天然植物原料，然后除菌過濾、無菌灌裝即得一種穩(wěn)定的保質(zhì)期較長的液體酸性果膠酶。

為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

一種強(qiáng)穩(wěn)定性液體酸性果膠酶的制備方法，包括如下步驟：