[發明專利]一種強穩定性液體酸性果膠酶的制備方法

在審

• 申請號: 201410713802.7
• 申請日: 2014-11-30
• 公開（公告）號: CN104450660A
• 公開（公告）日: 2015-03-25
• 發明（設計）人: 邵素英
• 申請（專利權）人: 邵素英
• 主分類號: C12N9/96
• 分類號: C12N9/96;C12N9/26
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種強穩定性液體酸性果膠酶的制備方法，包括如下步驟：

1)將發酵后獲得的酸性果膠酶發酵液添加100目-300目硅藻土，用500-800目濾布預涂硅藻土，采用板框過濾機進行過濾，操作壓力為0.14-0.24Mpa，得發酵粗酶液；

2)將步驟1)發酵粗酶液于室溫下在電場強度25-35kV/cm，脈沖時間200-400μs,脈沖頻率200-300Hz條件下進行高壓脈沖電場處理；

3)步驟2)經高壓脈沖電場處理的發酵粗酶液首先通過孔徑為0.4-0.8μm的微濾膜微濾，微濾進口壓力為0.1-0.12MPa，壓差0.07-0.09MPa，酶液溫度25-30℃；然后通過孔徑為0.005-0.015μm的超濾膜超濾，超濾進口壓力為0.15-0.20MPa，壓差0.08-0.10MPa，酶液溫度25-35℃；最后循環超濾得到濃縮酶液；

4)向步驟3)濃縮酶液中加入其質量2-5％的穩定劑，充分攪拌，均勻混合，用乳酸調節pH值2.8-5.2，然后于室溫下在電場強度30-40kV/cm，脈沖時間400-600μs,脈沖頻率200-300Hz條件下進行高壓脈沖電場處理，靜置20-40min；

5)步驟4)經調配、靜置后的濃縮酶液經除菌過濾、無菌灌裝即得強穩定性液體酸性果膠酶；

所述穩定劑的制備方法如下：按重量份數計，準確稱取果膠分解物25-35份，中草藥提取物15-25份，改性膳食纖維15-20份，海藻糖10-15份，天然抗氧化劑5-10份，多元醇2-5份，金屬氯化物1-3份，牛血清白蛋白0.1-0.3份；首先取改性膳食纖維，加入其質量5-12倍的去離子水，室溫浸泡4-6h,邊升溫邊攪拌，40-60℃保溫20-30min,攪拌，充分溶解，繼續保溫，邊攪拌邊依次加入果膠分解物、中草藥提取物、海藻糖、多元醇、金屬氯化物，然后降溫至25-35℃，邊攪拌邊依次加入牛血清白蛋白、天然抗氧化劑均勻混合即得穩定劑。

2.如權利1所述的強穩定性液體酸性果膠酶的制備方法，其特征在于，步驟1)所述硅藻土的添加量為每100mL發酵液添加0.5-1.5g。

3.如權利1所述的強穩定性液體酸性果膠酶的制備方法，其特征在于，所述果膠分解物的制備方法為：將新鮮的山楂果、柑桔皮、蘋果渣分別放入裝有1.2％碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、40KHz清洗5-10min，瀝干，切分成相等規格,長、寬為5-10mm，厚度3-5mm的片或丁，按質量比4-7:2-4:1-3均勻混合，然后于-21—-25℃冷凍10-30min；立即進行粉碎，粒徑為0.1-1mm；加入粉碎物質量3-5倍的去離子水，混合均勻，用檸檬酸調節pH值為2-3，于室溫下在電場強度35-45kV/cm，脈沖時間400-600μs,脈沖頻率200-300Hz條件下進行高壓脈沖電場處理，接著常壓煮沸30-50min，布袋過濾，濾渣用20-30％質量的濾液常壓煮沸40-60min,布袋過濾，合并濾液，硅藻土過濾，使濾液澄清，在75℃下減壓濃縮至固形物含量為6-10％，迅速冷卻至室溫，加入濃縮液1.5倍體積的pH值為2-3的95％乙醇，靜置20-30min,使果膠沉淀出來，4000r/min離心5-10min，回收沉淀，用2倍體積的無水乙醇洗脫，離心，回收沉淀，如此操作2次，得到的沉淀于40-60℃真空干燥2-3h,獲得果膠，加入果膠質量4-5倍的40-50℃水，攪拌，均勻混合，保溫，用乳酸調節pH值為4.5-5.5，加入0.3-0.8U/mL的果膠酶酶解2-4h,酶解液過濾，濾液于沸水中滅酶10-15min，冷卻至室溫，超濾濃縮、冷凍干燥即得果膠分解物。