[發明專利]高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法

在審

• 申請號: 201410711936.5
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN104404116A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 饒勝其;楊振泉;高璐;方維明;尹永祺;伍能建
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 戴朝榮

1.一種高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)用胃蛋白酶和堿性蛋白酶以單酶或有次序的雙酶分別對雞蛋清蛋白和乳清蛋白進行水解，取上述雞蛋清蛋白水解液的一種和上述乳清蛋白水解液的一種；

(2)采用超濾和樹脂富集上述兩種蛋白來源水解液中的強疏水性抗氧化肽，通過梯度洗脫獲得目標肽，即為樹脂粗分離組分；

(3)將步驟(1)中得到的兩種蛋白來源水解液或/和步驟(2)中得到的兩種蛋白來源水解液的樹脂粗分離組分分別進行兩兩復配，得到復配物。

2.根據權利要求1所述的高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，分別以雞蛋清蛋白粉和乳清蛋白粉為原料，加水配置成蛋白懸濁液，在85℃-95℃保持10min，并不斷攪拌使蛋白變性，冷卻至室溫，加入堿性蛋白酶進行水解；酶解結束后，加入胃蛋白酶水解，反應后滅酶，冷卻至室溫后調pH值至5.0-6.0，離心并收集上清液；

在步驟(2)中，對步驟(1)所得上清液進行超濾，收集濾過液，真空濃縮后冷凍干燥雞蛋清蛋白抗氧化肽和乳清蛋白抗氧化肽粗品；所得上述粗品用DA201-C大孔吸附樹脂吸附，然后用乙醇梯度洗脫，收集、真空濃縮并冷凍干燥洗脫組分，即可獲得兩種蛋白的高抗氧化活性樹脂粗分離組分；

在步驟(3)中，雞蛋清蛋白酶解肽和乳清蛋白酶解肽的水解液的肽濃度比為1：3-3：1進行復配；所述兩種水解液來源的粗分離組分的肽濃度比為1：3-3：1進行復配。

3.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，雞蛋清蛋白或乳清蛋白懸濁液的質量濃度為1％-6％。

4.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，堿性蛋白酶酶解條件為：酶的添加量為6000U-12000U/1g蛋白；pH值為6.5-11.0；水解溫度為50℃-70℃，酶解時間為1-6h。

5.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，胃蛋白酶酶解條件為：酶的添加量為8000U-25000U/1g蛋白；pH值為1.0-2.5；溫度為35-40℃，水解時間為1-6h。

6.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，胃蛋白酶和堿性蛋白酶的水解順序可以顛倒，或用上述兩種酶的一種進行雞蛋清蛋白水解液和乳清蛋白水解液的制備。

7.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法，其特征在于：在步驟(1)中，滅酶條件為：95℃保持15min，冷卻至室溫后在轉速4000r/min離心15min。

8.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法，其特征在于：在步驟(2)中，超濾的膜截留分子量為3kDa；超濾操作前超濾膜要先后用乙醇、pH值為1-2的酸液、pH值為11-12的堿液和去離子水各循環清洗20min，操作壓為0.1-0.2MPa。

9.根據權利要求2所述的高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法，其特征在于：步驟(2)中，取步驟(1)中所得抗氧化肽粗品溶于pH值為5.0-6.0的PBS緩沖液中，加入DA201-C大孔吸附樹脂靜態吸附1-3h，用體積分數為10-50％的乙醇洗滌后，再用體積分數為50-100％的乙醇洗脫，洗脫時間0.5-3h，收集、真空濃縮及冷凍干燥75％的乙醇洗脫組分，實現強疏水高活性抗氧化肽的富集。

10.權利要求1至9任一項所述的高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法制得的復配物。