[發明專利]高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法

在審

• 申請號: 201410711936.5
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN104404116A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 饒勝其;楊振泉;高璐;方維明;尹永祺;伍能建
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 戴朝榮

技術領域

本發明涉及食品技術領域，特別涉及一種高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法。

背景技術

天然蛋白來源的抗氧化肽因其分子量小、易吸收、清除自由基活性強、安全性高等特點，，在醫藥、化妝品、保健品和食品與飼料添加劑等方面有廣闊的應用前景。目前有關抗氧化肽的研究主要集中在抗氧化肽的酶解制備、分離、鑒定以及酶解產物或抗氧化肽的體內外生物活性研究。盡管部分抗氧化肽被證實具有強效的抗氧化活性，但其分離純化過程一般較繁瑣，成本較高。相對于純肽，高活性蛋白水解母液或粗分離組分從產品開發方面更具有可行性。因此，如何提高蛋白水解液的生物活性顯得尤為重要。據多項報道顯示，多種功效因子聯合作用比單一組分具有更好的效果，即呈現協同作用。已有研究證實，肽與肽之間及肽與非肽類抗氧化成分之間存在協同作用效果。據此，除了通過蛋白原料與蛋白酶的雙向篩選外，將活性較高的不同水解液或粗分離組分進行復配以發揮其協同效應，也是提高目標產品生物活性較好的一種方式。

牛乳蛋白和雞蛋蛋白及其水解產物均具有較高的生物效價和營養價值，目前有關這兩類蛋白來源酶解肽的抗氧化功能研究的報道近年來受關注程度呈遞增趨勢。此外，許多研究顯示堿性蛋白酶和胃蛋白酶對于蛋白原料中的高活性功能肽的釋放具有顯著效果。本研究擬將抗氧化活性較強的雞蛋清蛋白酶解肽和大豆蛋白酶解肽進行兩兩復配，通過總還原力、DPPH自由基和羥自由基三種抗氧化評價體系考察不同蛋白來源的酶解肽聯合作用下的抗氧化效應。

目前，缺乏一種具有抗氧化活性強的高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法。

發明內容

本發明的目的是提供一種抗氧化活性強的高抗氧化活性寡肽復配物及其制備方法。

本發明的技術方案如下：本發明提供了一種高抗氧化活性寡肽復配物的制備方法，包括以下步驟：

(1)用胃蛋白酶和堿性蛋白酶以單酶或有次序的雙酶分別對雞蛋清蛋白和乳清蛋白進行水解，取上述雞蛋清蛋白水解液的一種和上述乳清蛋白水解液的一種；

(2)采用超濾和樹脂富集上述兩種蛋白來源水解液中的強疏水性抗氧化肽，通過梯度洗脫獲得目標肽，即為樹脂粗分離組分；

(3)將步驟(1)中得到的兩種蛋白來源水解液或/和步驟(2)中得到的兩種蛋白來源水解液的樹脂粗分離組分分別進行兩兩復配，得到復配物。

進一步地，在步驟(1)中，分別以雞蛋清蛋白粉和乳清蛋白粉為原料，加水配置成蛋白懸濁液，在85℃-95℃保持10min，并不斷攪拌使蛋白變性，冷卻至室溫，加入堿性蛋白酶進行水解；酶解結束后，加入胃蛋白酶水解，反應后滅酶，冷卻至室溫后調pH值至5.0-6.0，離心并收集上清液；

在步驟(2)中，對步驟(1)所得上清液進行超濾，收集濾過液，真空濃縮后冷凍干燥雞蛋清蛋白抗氧化肽和乳清蛋白抗氧化肽粗品；所得上述粗品用DA201-C大孔吸附樹脂吸附，然后用乙醇梯度洗脫，收集、真空濃縮并冷凍干燥洗脫組分，即可獲得兩種蛋白的高抗氧化活性樹脂粗分離組分；

在步驟(3)中，雞蛋清蛋白酶解肽和乳清蛋白酶解肽的水解液的肽濃度比為1：3-3：1進行復配；所述兩種水解液來源的粗分離組分的肽濃度比為1：3-3：1進行復配。

進一步地，在步驟(1)中，雞蛋清蛋白或乳清蛋白懸濁液的質量濃度為1％-6％。

更進一步地，在步驟(1)中，堿性蛋白酶酶解條件為：酶的添加量為6000U-12000U/1g蛋白；pH值為6.5-11.0；水解溫度為50℃-70℃，酶解時間為1-6h。

進一步地，在步驟(1)中，胃蛋白酶酶解條件為：酶的添加量為8000U-25000U/1g蛋白；pH值為1.0-2.5；溫度為35-40℃，水解時間為1-6h。

進一步地，在步驟(1)中，胃蛋白酶和堿性蛋白酶的水解順序可以顛倒，或用上述兩種酶的一種進行雞蛋清蛋白水解液和乳清蛋白水解液的制備。

更進一步地，在步驟(1)中，滅酶條件為：95℃保持15min，冷卻至室溫后在轉速4000r/min離心15min。

進一步地，在步驟(2)中，超濾的膜截留分子量為3kDa；超濾操作前超濾膜要先后用乙醇、pH值為1-2的酸液、pH值為11-12的堿液和去離子水各循環清洗20min，操作壓為0.1-0.2MPa。