[發明專利]電化學發光檢測外周血循環腫瘤細胞抗原的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201410710610.0
• 申請日: 2014-12-01
• 公開（公告）號: CN104568923A
• 公開（公告）日: 2015-04-29
• 發明（設計）人: 王曉稼;沈曉亮;楊祖立;張劍琦;陳占紅;邵喜英;陳歡
• 申請（專利權）人: 浙江省腫瘤醫院;浙江天科高新技術發展有限公司
• 主分類號: G01N21/76
• 分類號: G01N21/76
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 林松海

技術領域

本發明涉及外周血中循環腫瘤細胞抗原電化學發光免疫檢測方法及試劑盒。

背景技術

在全球范圍內，乳腺癌是女性群體中最常見的惡性腫瘤，在所有病例中，約有20-30%為“最兇險的乳腺癌”——HER2陽性乳腺癌。相對于其他類型的乳腺癌，HER2陽性乳腺癌的疾病進展速度更快，惡性程度更高，更容易復發和轉移，預后也較差。

中國的乳腺癌的發病率呈逐年上升趨勢，尤其在京、津、滬等大城市，乳腺癌已位居女性惡性腫瘤發病率之首。根據乳腺癌的生物學特性，可以把其分成4～5個分子亞群，不同的亞群有不同的預后和治療策略。現代醫學已經進入了乳腺癌分類治療的時代，搞清患者的分子類型是正確治療的前提，在所有乳腺癌患者中，屬于HER2基因過表達者占20%-30%，和其他亞群乳腺癌相比，該類型乳腺癌患者更容易出現復發和轉移。如果只接受常規綜合治療，HER2陽性乳腺癌患者的生存時間僅為HER2陰性患者的一半；相反，如果能及早確定HER2狀態，及早采用針對性治療，與普通乳腺癌患者相比，HER2陽性患者的生存機會就會接近HER2陰性患者。

自從1987年Slamon等發現了HER2在人類乳腺癌發病機制中的作用，而經典的抗HER2靶向治療藥物曲妥珠單抗自1998年經美國FDA批準用于臨床以來也已應用了10余年，認為乳腺癌HER2狀態是乳腺癌患者重要的預后因子和靶向藥物療效的預測因子。大量研究數據和臨床實踐已使大家在抗HER2治療作用機制和臨床療效等方面達成一定的共識。而目前臨床上檢測HER2狀態都是基于患者原發灶或者轉移灶組織的檢測，而這些檢測往往會受到腫瘤組織（取材、固定和保存等操作不當）、檢測方法、腫瘤異質性或變異等影響，造成患者的HER2狀態無法確定，特別是一些復發轉移性患者，以往腫瘤組織保存時間較長或者轉移灶無法活檢獲取組織等情況，更無法在治療過程中對患者進行動態的監測。針對HER-2陽性乳腺癌患者的靶向治療，目前的臨床指南是：①?HER2陽性乳腺癌術后輔助治療建議使用赫賽汀靶向治療一年為標準治療；②?進展期HER-2陽性乳腺癌建議赫賽汀使用至少一年，并推薦使用直至進展，甚至，在靶向維持治療進展后仍可繼續赫賽汀靶向治療基礎上更換新的化療。

從HER-2陽性乳腺癌患者的生物學特征和靶向治療的療效，只有盡早、準確進行HER2狀態的檢測，才能對患者進行復發風險度準確評估和采取正確的針對性治療（赫賽汀等靶向藥物）。傳統對石蠟包埋組織采用常規免疫組化法和FISH（原位熒光雜交）方法對組織標本制作和保存有較高的要求，因此，一旦這些手術或者活檢組織標本不能滿足檢測要求，患者的HER-2狀態就無法確定，腫瘤分子分型和分類治療就無法進行，臨床上屢見這類患者，如標本保存時間太長、術前化療前標本留取太少、以往的檢測方法不標準、反復檢測HER-2屬于臨界狀態、患者復發轉移與原腫瘤生物學行為不符但轉移灶無法重新活檢等，臨床上無法鑒定患者真正的HER-2狀態；HER-2靶向藥物赫賽汀本身相當昂貴，還有潛在的心臟毒性，這使得臨床醫生在患者使用靶向治療的決策上左右為難、難以取舍。此外，除了客觀有效率的評價之外，?HER-2陽性乳腺癌患者接受靶向治療期間處于穩定或者完全緩解情況下，目前臨床上還無法對其進行進一步的動態療效檢測，循環腫瘤標記物和循環腫瘤細胞（CTC）檢測只能在一定程度上發揮作用，但并非真正反映體內HER-2陽性乳腺癌細胞的動態變化和療效。