[發(fā)明專利]一種乙酰氨基葡萄糖產(chǎn)量提高的重組枯草芽孢桿菌

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410709273.3
• 申請(qǐng)日: 2014-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN104498394B
• 公開（公告）日: 2018-03-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳堅(jiān);劉龍;堵國(guó)成;李江華;馬文龍;劉延峰;朱妍萩;顧洋
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N15/75;C12P19/26;C12R1/125
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙)11419
• 代理人: 張勇

1.一種乙酰氨基葡萄糖產(chǎn)量提高的重組枯草芽孢桿菌，其特征在于，是以枯草芽孢桿菌BSGN6-P_xylA-glmS為出發(fā)菌株，敲除其α-乙酰乳酸合成酶編碼基因和α-乙酰乳酸脫羧酶編碼基因，并表達(dá)氨基葡萄糖乙酰化酶；所述出發(fā)菌株是以枯草芽孢桿菌168為基礎(chǔ)，基因型作如下改造：ΔnagPΔgamPΔgamAΔnagAΔnagBΔldhΔpta::lox72，并以木糖誘導(dǎo)啟動(dòng)子P_xylA調(diào)控表達(dá)氨基葡萄糖合成酶基因glmS；所述α-乙酰乳酸合成酶編碼基因如NCBI-Gene ID:936852所示，α-乙酰乳酸脫羧酶編碼基因如NCBI-GeneID:936857所示。

2.一種構(gòu)建權(quán)利要求1所述重組枯草芽孢桿菌的方法，其特征在于，通過(guò)同源重組敲除敲除α-乙酰乳酸合成酶編碼基因和α-乙酰乳酸脫羧酶編碼基因，阻斷宿主菌由丙酮酸生成乙偶姻和2,3-丁二醇的途徑，在已敲除alsS和alsD的宿主菌內(nèi)，運(yùn)用表達(dá)載體pP43NMK過(guò)量表達(dá)釀酒酵母來(lái)源的氨基葡萄糖乙?；妇幋a基因。

3.一種應(yīng)用權(quán)利要求1所述重組枯草芽孢桿菌發(fā)酵生產(chǎn)氨基乙酰葡萄糖的方法，其特征在于，是將種子培養(yǎng)液轉(zhuǎn)入發(fā)酵培養(yǎng)基，于30-37℃、200-220rpm條件下培養(yǎng)44-52h。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述發(fā)酵培養(yǎng)基按g/L計(jì)含有：玉米漿干粉20，酵母粉20，K2HPO₄·3H₂O 12.5，KH₂PO₄2.5，CaCO₃5，微量元素15ml/L；微量元素溶液按g/L計(jì)含有：MnSO₄·5H₂O 1.0，Cocl₂·6H₂O 0.4，NaMoO₄·2H₂O 0.2，ZnSO₄·7H₂O 0.2，Alcl₃·6H₂O 0.1，Cucl₂·H₂O 0.1，H₃BO₄0.05，含5M HCl。

5.權(quán)利要求1所述重組枯草芽孢桿菌在氨基乙酰葡萄糖生產(chǎn)中的應(yīng)用。