[發明專利]黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法及其應用

在審

• 申請號: 201410707944.2
• 申請日: 2014-11-28
• 公開（公告）號: CN105687253A
• 公開（公告）日: 2016-06-22
• 發明（設計）人: 張耀洲;馬琳
• 申請（專利權）人: 天津耀宇生物技術有限公司
• 主分類號: A61K36/06
• 分類號: A61K36/06;A61P35/00
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 李迎春

1.一種黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于包括以下步驟：

(1)以黃綠蜜環菌子實體為原料，室溫陰干處理后，在40～60℃溫度下烘干脫水，然后進行超微粉碎處理，獲得超微粉；

(2)將步驟(1)所得的超微粉按1g︰(5～15)mL的料液比加入乙醇，在30～70℃溫度下提取1～6h，每0.5h～1h攪拌一次，室溫靜止1～5h后離心，取沉淀重復1～3次，合并所得上清液減壓濃縮至膏狀，獲得黃綠蜜環菌小分子乙醇提取物；

(3)按質量體積比加入5～10倍的正己烷-乙醇二元混合溶劑，進行超聲溶解，溶解后過有機濾膜，得到黃綠蜜環菌小分子乙醇提取物的樣品溶液；

(4)將步驟(3)獲得的小分子乙醇提取物的樣品溶液在以填料為正相分離材料Silica的制備色譜上進行分離純化，采用A為正己烷、B為乙醇的二元流動相體系，分離純化的條件為：0～18min93％A-7％B等度洗脫、18～28min60％A-40％B等度洗脫、28～45min5％A-95％B等度洗脫，根據紫外吸收光譜收集20-26min洗脫液、27.25-28.5min洗脫液、38.5-41min洗脫液，減壓濃縮并烘干，得到本發明抗肝癌活性組分。

2.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(1)中超微粉碎在-20～4℃溫度下進行，時間為5～20min。

3.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(2)中乙醇的提取溫度為30～70℃。

4.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(3)中正己烷-乙醇二元混合溶劑的正己烷與乙醇的體積比為2︰1。

5.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(3)中有機濾膜的孔徑為0.22～0.45μm。

6.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(4)中制備色譜采用的分離色譜柱的直徑為50mm、柱長為250mm，正相分離材料Silica的粒徑為8～10μm。

7.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(4)中制備色譜的檢測波長為260nm，進樣量為1.4g，流速為50mL/min。

8.根據權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分的提取方法，其特征在于：所述步驟(2)、(4)中減壓濃縮采用旋轉蒸發儀進行，工藝條件為溫度70℃、真空度0.08Mpa。

9.權利要求1所述的黃綠蜜環菌抗肝癌活性組分在制備抗肝癌藥物或抗肝癌保健食品中的應用。