[發(fā)明專利]基于硼酸熒光探針的分子印跡微球檢測糖蛋白的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201410705830.4
• 申請日: 2014-11-27
• 公開（公告）號: CN104483295A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張靜;倪艷麗;魏靜茹
• 申請（專利權(quán)）人: 陜西師范大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責(zé)任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種基于硼酸熒光探針的分子印跡微球檢測糖蛋白的方法，其特征在于它由下述步驟組成：

(1)單分散多孔交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球表面鍵合氨基

將單分散多孔交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球在弱酸性條件下水解，得到表面為羥基的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球，將此微球分散于無水乙醇中，加入氨水與3-氨丙基三乙氧基硅烷的體積比為1:10～20的混合液，表面為羥基的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球與3-氨丙基三乙氧基硅烷的質(zhì)量-體積比為1g:20～40mL，超聲分散均勻，室溫攪拌12小時，得到表面鍵合氨基的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球；

(2)單分散多孔交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球表面鍵合硼酸熒光探針

將步驟(1)得到的表面鍵合氨基的單分散多孔交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球分散于無水乙醇中，依次加入2-(4-二羥基硼)苯基-4-羧基喹啉、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，表面鍵合氨基的單分散多孔交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球與2-(4-二羥基硼)苯基-4-羧基喹啉、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺、N-羥基琥珀酰亞胺的質(zhì)量比為1:0.8～1.2:0.8～1.2:0.4～0.6，超聲分散均勻，40℃攪拌5～10小時，得到表面鍵合硼酸熒光探針的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球；

(3)制備具有熒光特性的指定糖蛋白分子印跡微球

將步驟(2)得到的表面鍵合硼酸熒光探針的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球和指定糖蛋白加入pH值為7.5的磷酸鹽緩沖液中，混合均勻，密封，室溫孵育3小時，所得產(chǎn)物與過硫酸銨、苯胺在室溫條件下攪拌1～4小時，其中表面鍵合硼酸熒光探針的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球和指定糖蛋白、過硫酸銨、苯胺的質(zhì)量比為1:0.005～0.015:0.5～2:1～4，得到具有熒光特性的指定糖蛋白分子印跡微球；

(4)熒光法檢測待測樣品

將步驟(3)得到的具有熒光特性的指定糖蛋白分子印跡微球分散于pH值為5.5～9.5的磷酸鹽緩沖液中，配制成0.1mg/mL的指定糖蛋白分子印跡微球分散液，向該分散液中加入指定糖蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品，用熒光光譜儀測量不同濃度下指定糖蛋白對應(yīng)體系的熒光強(qiáng)度，繪制熒光強(qiáng)度隨指定糖蛋白濃度的對數(shù)值變化的標(biāo)準(zhǔn)曲線；按照上述方法用熒光光譜儀測量待測樣品的熒光強(qiáng)度，根據(jù)待測樣品的熒光強(qiáng)度，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程即可確定待測樣品中指定糖蛋白的濃度。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于硼酸熒光探針的分子印跡微球檢測糖蛋白的方法，其特征在于：所述的步驟(3)中，表面鍵合硼酸熒光探針的單分散交聯(lián)甲基丙烯酸環(huán)氧丙酯微球和指定糖蛋白、過硫酸銨、苯胺的質(zhì)量比為1:0.01:1:1.5。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的基于硼酸熒光探針的分子印跡微球檢測糖蛋白的方法，其特征在于：所述的步驟(4)中，磷酸鹽緩沖液的pH值為7.5。

4.根據(jù)權(quán)利要求1～3任意一項(xiàng)所述的基于硼酸熒光探針的分子印跡微球檢測糖蛋白的方法，其特征在于：在步驟(3)中，所述的指定糖蛋白為辣根過氧化物酶或卵清蛋白。