[發明專利]一種用于鑒定三系雜交水稻不育系駿1A的特異引物組合

有效

• 申請號: 201410693230.0
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104404147A
• 公開（公告）日: 2015-03-11
• 發明（設計）人: 徐鑫;劉學群;譚艷平;王春臺;熊杰
• 申請（專利權）人: 中南民族大學
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 武漢華旭知識產權事務所 42214
• 代理人: 周宗貴;劉榮

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，特別涉及一種用于檢測三系雜交水稻不育系駿1A的特異引物組合。

背景技術

我國是世界上最大的雜交水稻種子生產國和消費國，具有龐大的雜交水稻種子市場。目前國內雜交水稻年種植面積約占水稻年種植總面積的59％以上，使水稻產量大幅度提高，為保障我國的糧食安全做出了重要貢獻。獲得高純度的雜交種子是充分發揮雜種優勢增產潛力的基礎。機械混雜和生物學混雜是三系雜交水稻親本雜株的主要來源。種子純度是衡量雜交水稻種子質量的主要指標，純度的下降將導致作物產量和質量的明顯降低。低純度、真實性差的雜交水稻種子給農業生產帶來極大損失，是種子質檢部門、育種研究單位、制種單位和種子公司共同關心的問題。三系雜交水稻不育系的純度是制約雜交稻生產的關鍵因素。

三系雜交水稻不育系“駿1A”為本申請人自主培育的，不育系“駿1A”與恢復系“R0172”配組育成的三系雜交中稻品種“駿優172”，以及不育系“駿1A”與恢復系“R522”配組育成的三系雜交早熟中稻品種“駿優522”，均已通過湖北省品種審定，抗稻瘟病，米質優，是適合湖北省恩施州種植的農作物新品種。

在實現上述研發的過程中，本申請的發明人發現現有技術至少存在以下問題：

沒有鑒定三系雜交水稻不育系“駿1A”的特異引物，無法將上述水稻品種與其親本區分開，不能對其進行快速的種子純度分子標記鑒定和相關的分子標記輔助育種等工作。

發明內容

本發明提供了一種用于鑒定三系雜交水稻不育系駿1A的特異引物組合，解決了背景技術中的問題，采用該引物組合能夠快速、準確的對三系雜交水稻不育系駿1A進行鑒定。

實現本發明上述目的所采用的技術方案為：

一種用于鑒定三系雜交水稻不育系駿1A的特異引物組合，包括ZJJU01、ZJJU02、ZJJU03和ZJJU04，其中ZJJU01正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.1：GAGAGAGAGAGAGAGACACTATTAACG；

ZJJU?01反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.2：GAGAGAGAGAGAGAGACGGAGG；

ZJJU?02正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.3：TCTCTCTCTCTCTCTCAAACAGAA；

ZJJU?02反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.4：CTCTCTCTCTCTCTCACTGTCG；

ZJJU?03正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.5：TCAGTAGCTGTGTCTCAGAACTATGAC；

ZJJU?03反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.6：GTACCTCTTTTCGGCCAGGA；

ZJJU?04正向引物如序列表中SEQ?ID?NO.7：GGATAATCCGCATCAAGAAG；

ZJJU?04反向引物如序列表中SEQ?ID?NO.8：GGTCACCCGAGAATTGCAT。

本發明同時還提供了根據上述引物組合來鑒定三系雜交水稻不育系駿1A的方法，步驟如下：首先提取目標植物基因組，然后以基因組為模板，用權利要求1所述的特異引物組合進行PCR檢測。

所述的PCR反應條件為：95℃5min；95℃變性30s，65℃退火40s，其中每個循環降低0.7℃，72℃延伸1min30s，15個循環；

94℃變性30s，55℃退火45s，72℃延伸2min，25個循環；72℃后延伸10min。

所述的PCR反應體系為：50ng/μl的DNA模板0.8μl，10×PCR緩沖液1μl，2.5mM?dNTPs?0.8μl，10μM正、反向引物各0.2μl，DNA聚合酶0.5U，ddH₂O補足至10μl。

本發明還提供了一種含有上述特異引物組合的檢測試劑盒。

上述試劑盒能夠在鑒定三系雜交水稻不育系駿1A的純度以及輔助其育種中進行應用。

本發明根據能鑒定三系雜交水稻不育系駿1A的ISSR引物擴增序列設計引物，通過PCR擴增，可以快速從其他水稻品種中鑒定三系雜交水稻不育系駿1A。本發明提供的三系雜交水稻不育系駿1A的鑒定方法，可用于上述水稻品種的純度鑒定，進而在輔助其育種中進行應用。

附圖說明

圖1為本實施例中通過PCR反應在水稻中的擴增結果圖A

圖2為本實施例中通過PCR反應在水稻中的擴增結果圖B。

具體實施方式