[發明專利]高純度重組人干擾素α2b的制備方法

有效

• 申請號: 201410691151.6
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104356223B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 許培;宋禮華;王榮海;董世建;周樂春;沈毅;李增禮;程婷;儲成風;倪曉燕
• 申請（專利權）人: 安徽安科生物工程（集團）股份有限公司
• 主分類號: C07K14/56
• 分類號: C07K14/56;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 合肥誠興知識產權代理有限公司34109
• 代理人: 湯茂盛

技術領域

本發明涉及醫藥技術領域，具體涉及一種高純度重組人干擾素α2b的制備方法。

背景技術

干擾素(IFN)是一類具有廣譜抗病毒活性的蛋白質，根據干擾素氨基酸結構、抗原性和細胞來源，可將其分為三類：α干擾素、β干擾素以及γ干擾素，其中α干擾素是應用較為廣泛的一類干擾素，臨床上主要用于治療乙型肝炎、丙型肝炎等病毒性疾病，也用作一些腫瘤化療藥物的聯合用藥。但是，重組蛋白藥物在生產或儲存時，其中的氨基酸易被修飾而產生各種變異體，這些變異體被稱作相關蛋白(Related proteins)，具體的，這些相關蛋白的產生主要來自以下兩個方面：一是原核系統在表達異源蛋白質時，因其N末端氨基酸的不完全加工導致的產品N末端含有多種結構形式，如N末端甲硫胺酰化、乙酰化、甲酰化以及氨基酸殘基缺失等；二是干擾素本身化學降解會生成相關蛋白，如脫酰胺、氧化、水解等。相關蛋白的存在會帶來一些不良后果，尤其是結構上的變異可能會在患者體內產生免疫反應及副作用，進而影響重組蛋白藥物的臨床療效，因此，相關蛋白的分析及控制對于重組蛋白藥物的安全、有效使用來說尤為重要。

目前，歐洲藥典是采用RP-HPLC法(即反相高效液相色譜法)分離檢測干擾素α2b中的大部分相關蛋白，而我國藥典目前還沒有采用上述方法檢測相關蛋白，同時，中國和歐洲藥典對干擾素α2b的N段序列的標準也有差異，具體如下表1所示：

干擾素α2b的質量標準

項目中國藥典2010歐洲藥典8.0電泳純度≥95％≥99％

SE-HPLC純度≥95％無RP-HPLC純度無≥95％比活性≥1×10⁸IU/mg≥1.4×10⁸IU/mg等電點4.0-6.75.8-6.3N段序列(M)CDLPQTHSLGSRRTLCDLPQTHSLGSRRTL