[發明專利]高純度重組人干擾素α2b的制備方法

有效

• 申請號: 201410691151.6
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104356223B
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 許培;宋禮華;王榮海;董世建;周樂春;沈毅;李增禮;程婷;儲成風;倪曉燕
• 申請（專利權）人: 安徽安科生物工程（集團）股份有限公司
• 主分類號: C07K14/56
• 分類號: C07K14/56;C07K1/20;C07K1/18
• 代理公司: 合肥誠興知識產權代理有限公司34109
• 代理人: 湯茂盛

1.一種高純度重組人干擾素α2b的制備方法，其包括以下步驟：

a)將重組人干擾素α2b菌體裂解、復性，得復性產物；

b)將復性產物依次通過陽離子柱、疏水柱和陰離子柱層析純化，即得產品；

所述的陽離子柱層析方法為：采用緩沖液A預平衡陽離子交換介質后上樣，用緩沖液B進行第一次洗脫，待基線歸零后，用緩沖液C進行第二次洗脫，收集第二個蛋白洗脫峰的洗脫液；

所述的疏水柱層析方法為：向陽離子柱層析收集的洗脫液中加入硫酸銨溶液至洗脫液中硫酸銨濃度為0.8-1.5M，采用緩沖液D預平衡疏水層析介質后上樣，用緩沖液E進行第一次洗脫，待基線歸零后，用緩沖液F進行第二次洗脫，收集第一個蛋白洗脫峰的洗脫液；

所述的陰離子柱層析方法為：將疏水柱層析收集的洗脫液稀釋5-10，采用緩沖液G預平衡陰離子交換介質后上樣，先用緩沖液H洗滌10-20個柱體積，然后再用緩沖液I洗脫，收集第一個洗脫峰；

所述的緩沖液G為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、硼酸-硼酸鈉、Tris-鹽酸或甘氨酸-氫氧化鈉，緩沖液G的pH為7.4-9.0、濃度5-50mM；緩沖液H為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、Bis-Tris-鹽酸或乙酸-乙酸鈉，緩沖液H的pH為4.5-7.0、濃度10-50mM，且緩沖液H中含有0-20mM氯化鈉；緩沖液I為磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、Bis-Tris-鹽酸或乙酸-乙酸鈉，緩沖液I的pH為4.5-7.0、濃度20-50mM，且緩沖液I中含有50-80mM氯化鈉；

所述的陰離子交換介質為Q-Sepharose FF、DEAE-Sepharose FF或Q-Sepharose XL。

2.根據權利要求1所述的高純度重組人干擾素α2b的制備方法，其特征在于：所述的緩沖液A是磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉、檸檬酸-檸檬酸鈉、磷酸氫二鈉-檸檬酸、乙酸-乙酸鈉或Bis-Tris-鹽酸，緩沖液A的pH為3.6-6.0、濃度20-50mM；緩沖液B是加有50-100mM 氯化鈉溶液的緩沖液A；緩沖液C是加有100-200mM氯化鈉溶液的緩沖液A；

所述的陽離子交換介質為CM-Sepharose FF、SP-Sepharose FF、S-Sepharose FF或SP-Sepharose XL。

3.根據權利要求1或2所述的高純度重組人干擾素α2b的制備方法，其特征在于：所述的緩沖液D是濃度為0.8-1.5M的硫酸銨溶液，緩沖液E是濃度為0.4-0.7M的硫酸銨溶液，緩沖液F是濃度為0.1-0.2M的硫酸銨溶液；

所述的疏水層析交換介質為Butyl Sepharose 4FF、Octyl Sepharose 4FF或Phenyl Sepharose 6FF。

4.根據權利要求1所述的高純度重組人干擾素α2b的制備方法，其特征在于：所述步驟a的具體操作步驟如下：

1)按照1g:3ml的質量體積比向重組人干擾素α2b菌體中加入6M鹽酸胍，在3-5℃條件下攪拌裂解4h，得裂解液；

2)將裂解液裝入透析袋中，依次透析pH7.4的PBS兩次、pH3.0的20mM醋酸兩次以使裂解液復性；

3)將復性的裂解液離心，取上清液過濾，得到的濾液即為復性產物。