[發明專利]一種原位形成拉曼增強基底檢測水中大腸桿菌的方法

有效

• 申請號: 201410687082.1
• 申請日: 2014-11-26
• 公開（公告）號: CN104330399A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 陳章;李會東;李志賢;陳國梁
• 申請（專利權）人: 湖南科技大學
• 主分類號: G01N21/65
• 分類號: G01N21/65
• 代理公司: 張家界市慧誠商標專利事務所 43209
• 代理人: 高紅旺

1.?一種原位形成拉曼增強基底檢測水中大腸桿菌的方法，其特征在于，其步驟如下：

（1）選擇檢測大腸桿菌：使用LB培養基培養，37℃條件下培養過夜，取細菌培養液，4000rpm/min離心5min，去除培養基，使用pH7.4?PBS緩沖液重懸菌體，稀釋菌體，等待檢測；

（2）原位形成拉曼增強基底：修飾有1μg/mL-10μg/mL葡萄糖氧化酶和0.1μg/mL-20μg/mL抗大腸桿菌抗體的0.1μg/mL-1μg/mL氧化石墨烯與大腸桿菌結合，2000rpm/min-3000rpm/min離心5min，收集菌體，pH7.4?PBS緩沖液重懸；加入0.5μg/mL-50μg/mL銀納米種子，氧化石墨烯表面的葡萄糖氧化酶催化1μg/mL-50μg/mL葡萄糖，生成過氧化氫；過氧化氫與10μg/mL-50μg/mL銀離子反應，促進銀納米種子生長，形成銀納米顆粒，并吸附到氧化石墨烯表面，原位形成拉曼增強基底；2000rpm/min-3000rpm/min離心5min，收集菌體，pH7.4?PBS緩沖液重懸；

（3）加入10μg/mL-20μg/mL拉曼報告分子，反應10min，?2000rpm/min-3000rpm/min離心5min，收集菌體，使用pH7.4?PBS緩沖液清洗菌體，2000rpm/min-3000rpm/min離心5min收集菌體，使用激光拉曼儀檢測拉曼報告分子的拉曼增強信號，拉曼信號強度與大腸桿菌濃度成正相關性，以此實現對水中大腸桿菌的信號放大檢測。

2.根據權利1所述的方法，其特征是，所述的拉曼報告分子為羅丹明B。