[發明專利]文冠果莖段組織的培育方法

有效

• 申請號: 201410685936.2
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104322376A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 張勇
• 申請（專利權）人: 張勇
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廣州市越秀區海心聯合專利代理事務所(普通合伙) 44295
• 代理人: 黃為

技術領域

本發明公開了一種植物組織的培育方法，具體的說，是文冠果莖段組織的培育方法，屬于植物組織培育技術領域。

背景技術

文冠果又名木瓜、文官果，是高級油料。過去，人們對其鮮食、加工、藥用和觀賞等價值未予重視。文冠果樹姿婀娜，葉型優美，花色瑰麗，花期晚且長，近年來，開始作為新型觀賞樹木栽培。文冠果具有花美，葉奇，果香，枝瘦，體拙的特點，易于人工控制樹型，創造各種盆景。北方地區公路、城市街道、風景區都可作為觀賞樹木栽培。木材肉紅色，色澤瑰麗，紋理美觀，材質堅硬，是制作家具的優良材料。種殼可制活性炭。榨油后餅粕蛋白質含量高，無毒，適口性好，是重要蛋白質食品原料。

文冠果繁殖技術包括有性繁殖和無性繁殖。文冠果種子在未經任何處理情況下發芽率僅為6％，濕沙埋藏和溫水浸種等催芽方法可以提高種子發芽率，經高溫處理后發芽率也僅達33％，也有采用低頻電流和鈷輻射處理的報道，但種子發芽率仍不理想；也有報道采用嫁接和扦插技術對文冠果進行繁殖，但嫁接成活率和扦插生根率都很低，極大地限制了文冠果的繁育以及推廣工作。

組織培養以其大量、快速繁殖，試驗材料需求少的優點被廣大科研工作者所選用。現已報道，通過文冠果莖尖、種子等外植體通過器官苗途徑獲得有效植株。嫩莖、在文冠果組織培養體細胞胚胎發生途徑中，目前已有學者成功獲得文冠果植株，但均采用文冠果種胚為外植體。種胚雖然是較好的實驗材料，且容易獲得，但文冠果結實率低，種子具有良好的利用價值等特征均限制了利用種胚進行擴繁的途徑。最主要的是文冠果的種子變異性強，未必能完全保留優樹的優良性狀，這也大大削弱了通過體細胞胚胎發生途徑獲得優良苗木的可能性。

發明內容

針對上述不足，本發明的目的在于提供一種成活率高，組織分化速度快的培養方法。

為解決上述技術問題，本發明提供的技術方案是這樣的：該文冠果莖段組織的培育方法，依次包括下述步驟：

1)冠果莖段組織消毒處理

采集文冠果當年生休眠枝條的中、下部莖段，進行修剪，減去病死枝和風干枝，用無菌水清洗干凈，置于廣口瓶中，75％雙氧水點滴葉腋處，再用75％酒精消毒20～40s，沖洗干凈后，再用新潔爾滅消毒30～60s，并用無菌水清洗；

2)初代培養

將消毒后干凈枝條去掉頂端和底端，剪成長4～6cm、帶一個腋芽的莖段斜插入初代培養基中在24～26℃，光培養12/12h，光強1000～1500lux培養15～17天；

其中：所述的初代培養基是通過下述方法制備：在1/2MS基本培養基中，添加蔗糖20～30g/L，瓊脂5～6g/L，6-芐氨基嘌呤15～25mg/L，谷氨酰胺100～200mg/L定容后，用pH調節劑調節pH至5.3～6.3，滅菌后冷卻凝固待用；

3)繼代培養

將誘導出的不定芽切取，再將取芽后的莖段接入新配置的初代培養基中繼續培養，每隔15～17天取芽一次，重復操作；

4)生根培養

將切取出來不定芽接入生根培養基，在24～26℃，光培養12/12h，光強1000～1500lux培養5～7天；

其中：所述的生根培養基是通過下述方法制備的：在1/4MS基本培養基中，添加麥芽糖30～90g/L，瓊脂5～6g/L，6～芐氨基嘌呤15～25mg/L，6～糠基氨基嘌呤1.5～2.5mg/L定容后，用pH調節劑調節pH至5.3～6.3，滅菌后，加入茶油100～200mg/L，冷卻凝固待用。

上述的文冠果莖段組織的培育方法，所述的pH調節劑為1mol/L的HCl和NaOH。

上述的文冠果莖段組織的培育方法，所述的的滅菌方法是在110℃下滅菌20min。

與現有技術相比，本發明提供的技術方案具有如下技術優點：本發明提供的技術方案通過對初代培養基和生根培養基的組分篩選優化，對各個培養條件的嚴格考察，使得組織培養基成活率高，組織分化速度快。

具體實施方式

下面結合具體實施方式對本發明的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對本發明的任何限制，任何人在本發明權利要求范圍內所做的有限次的修改，仍在本發明的權利要求保護范圍之內。

實施例1

本發明提供的一種文冠果莖段組織的培育方法，該方法依次包括下述步驟：

1)消毒處理

采集文冠果當年生休眠枝條的中、下部莖段，進行修剪，減去病死枝和風干枝，用無菌水清洗干凈，置于廣口瓶中，75％雙氧水點滴葉腋處，再用75％酒精消毒25s，沖洗干凈后，再用新潔爾滅消毒30～60s，并用無菌水清洗；