[發明專利]一種b型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法

有效

• 申請號: 201410685453.2
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104387491B
• 公開（公告）日: 2017-12-05
• 發明（設計）人: 廖國陽;朱文勇;寸怡娜;李衛東;馬磊;鐘漢斌;代小虎;歐陽圣潔;王明清;管嬌瓊;胡文著;宋紹輝;蔡瑋;高菁霞;張新文;戴宗祥;姜述德
• 申請（專利權）人: 中國醫學科學院醫學生物學研究所
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 昆明正原專利商標代理有限公司53100
• 代理人: 徐玲菊

1.一種b型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法，其特征在于：所述制備方法能同時去除雜蛋白及氯化血紅素對莢膜多糖的干擾，所述制備方法包括以下步驟：

a、將Hib粗多糖溶于體積濃度為1～30%的曲拉通X-100水溶液、曲拉通X-114水溶液、吐溫-80水溶液或乙基苯基聚乙二醇水溶液中，使Hib粗多糖的最終濃度為5～30mg/mL，攪拌過夜，得粗糖溶解液；

b、在步驟a所得粗糖溶解液中添加(NH₄)₂SO₄使其質量濃度為20%至飽和，攪拌20～30分鐘后，在8000～10000rpm下進行離心分離20～40分鐘，取下層溶液；

c、在步驟b所得下層溶液中添加曲拉通X-100、曲拉通X-114、吐溫-80或乙基苯基聚乙二醇，使其體積濃度為3～30%，再攪拌30～60分鐘后，在8000～10000rpm下進行離心分離20～40分鐘，取下層溶液；

d、在步驟c所得下層溶液中添加無水乙醇至其體積濃度為2～20%，攪拌20～40分鐘后，在8000～10000rpm下進行離心分離20～40分鐘，取下層溶液；

e、將步驟d所得下層溶液用生理鹽水稀釋至所含莢膜多糖的濃度為10～4000mg/L，再用100KD膜包進行超濾，所得濃縮液體即為b型流感嗜血桿菌莢膜多糖溶液。

2.根據權利要求1所述的b型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法，其特征在于：所述步驟a中曲拉通X-100水溶液、曲拉通X-114水溶液、吐溫-80水溶液、乙基苯基聚乙二醇水溶液的pH為5.5～7.5。

3.根據權利要求1所述的b型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法，其特征在于：所述步驟b、c、d均分別重復1～3次，收集下層溶液后再繼續下一步驟。

4.根據權利要求1所述的b型流感嗜血桿菌莢膜多糖的制備方法，其特征在于：所述步驟e中的超濾重復3～5次。