[發明專利]環介導等溫擴增法檢測B群鏈球菌的引物組及試劑盒

有效

• 申請號: 201410682430.6
• 申請日: 2014-11-24
• 公開（公告）號: CN104328212A
• 公開（公告）日: 2015-02-04
• 發明（設計）人: 楊煒華;汪運山;裴鳳艷;紀明宇;曹翠明;張芳;田娟娟
• 申請（專利權）人: 濟南市中心醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/14;C12N15/11;C12R1/46
• 代理公司: 濟南圣達知識產權代理有限公司 37221
• 代理人: 趙妍

1.一種環介導等溫擴增法檢測B群鏈球菌的引物組，其特征在于，包括，特異性外引物F3：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：1所示；特異性外引物B3：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：2所示；特異性內引物FIP：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：3所示；特異性內引物BIP：其核苷酸序列如SEQ?ID?NO：4所示。

2.一種環介導等溫擴增法檢測B群鏈球菌的試劑盒，其特征在于，包括裝有18μL反應液的反應管，裝有10μL?GBS?DNA的陽性對照管，裝有100μL無菌超純水的陰性對照管，所述反應液內含反應緩沖液、Bst?DNA聚合酶、顯色液、外引物F3、外引物B3、內引物FIP、內引物BIP；所述反應緩沖液各組分的濃度如下：400mM的Tris-Hcl，pH8.8；20mM的氯化鉀；20mM的硫酸銨；16mM的硫酸鎂和0.2％Tween₂₀、1.6M的甜菜堿、2.8mM×4種dNTP；Bst?DNA聚合酶的活性含量為：160單位/18μL；顯色液為：錳離子鰲和型鈣黃綠素，0.001μmol/18μL；引物F3：4pmol/18μL，引物B3：4pmol/18μL；引物FIP：32pmol/18μL，引物BIP：32pmol/18μL。

3.如權利要求2所述試劑盒，其特征在于，裝有18μL反應液的反應管為8個，裝有10μL?GBS?DNA的陽性對照管1個，裝有100μL無菌超純水的陰性對照管1個。

4.如權利要求2或3所述試劑盒，其特征在于，所述試劑盒內還含20個適配1-10μl移液器的Tip頭。

5.如權利要求2-4任一所述試劑盒的使用方法，其特征在于，將2μL待檢DNA加入反應管內，混勻，同時設陰性對照和陽性對照，將反應管置水浴鍋中進行擴增，擴增條件為：60-65℃水浴恒溫反應30-40min，觀察顏色變化。