[發(fā)明專利]一種金黃色葡萄球菌的快速檢測(cè)試劑盒及其應(yīng)用

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201410682297.4
• 申請(qǐng)日: 2014-11-24
• 公開（公告）號(hào): CN104388565A
• 公開（公告）日: 2015-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張輝;陳曦
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢明曼基因工程有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/68
• 分類號(hào): C12Q1/68;C12Q1/14;C12R1/445
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種可視化金黃色葡萄球菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)檢測(cè)試劑盒，其特征在于，由反應(yīng)預(yù)混液、熒光顯色劑、內(nèi)蓋附有滅菌濾紙片的檢測(cè)管組成，其中的反應(yīng)預(yù)混液包括Bst?DNA聚合酶、反應(yīng)緩沖液、dNTP、硫酸鎂、特異性引物組、甜菜堿和無菌雙蒸水；

所述特異性引物組包括外引物F3和B3，內(nèi)引物FIP和BIP，其核苷酸序列如下：

F3：5’-AACAGTATATAGTGCAACTTCAA-3’

B3：5’-CTTTGTCAAACTCGACTTCAA-3’

FIP：5’-ATGTCATTGGTTGACCTTTGTACATTTTTAAATTACATAAAGAACCTGCGA-3’

BIP：5’-GTTGATACACCTGAAACAAAGCATCTTTTATTTTTTTCGTAAATGCACTTGC-3’。

2.所述試劑盒的應(yīng)用，其特征在于，通過對(duì)樣品簡(jiǎn)單的處理便可快速檢測(cè)樣品中的金黃色葡萄球菌；使用方法包括細(xì)菌DNA的提取、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增和顯色結(jié)果判定：

1）、細(xì)菌DNA的提取：

采用DNA快速提取法，即將樣品稀釋液煮沸，上清液作為環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)的DNA模板；

2）、LAMP擴(kuò)增：

采用25μl反應(yīng)體系：內(nèi)引物FIP和BIP各1.6μM，外引物F3和B3各0.2μM，dNTP?1mM，甜菜堿0.5M，硫酸鎂6mM，Bst?DNA聚合酶8U，模板DNA?5μl，10×ThermoPol?Reaction?Buffer?2.5μl，選擇64℃避光反應(yīng)60分鐘；

3）、檢測(cè)結(jié)果判定：

將檢測(cè)管倒置甩動(dòng)，使反應(yīng)液與內(nèi)蓋上的濾紙片充分混勻，室溫放置2分鐘；正置后用力甩動(dòng)檢測(cè)管，使管內(nèi)混有熒光顯色劑的反應(yīng)液聚于檢測(cè)管底部，在比色卡背景下觀察反應(yīng)液顏色：黃綠色則說明樣品中含有金黃色葡萄球菌，棕色則說明樣品中沒有金黃色葡萄球菌。