[發(fā)明專利]一種L-天冬氨酸制取工藝在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201410681746.3 | 申請日： | 2014-11-24 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN104531797A | 公開（公告）日： | 2015-04-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 肖大年;張政;余煉 | 申請（專利權(quán)）人： | 廣西大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12P13/20 | 分類號(hào)： | C12P13/20;C12N11/02;C12R1/19 |
| 代理公司： | 廣州三環(huán)專利代理有限公司 44202 | 代理人： | 郝傳鑫 |
| 地址： | 530004 廣西*** | 國省代碼： | 廣西;45 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 天冬氨酸 制取 工藝 | ||
1.一種L-天冬氨酸制取工藝，其特征在于，其工藝步驟如下：
(1)選育菌株：選用大腸桿菌作為天冬氨酸酶的來源，用肉汁培養(yǎng)基培養(yǎng)種子，接種與搖瓶培養(yǎng)基中，于32℃下振搖培養(yǎng)12h，逐級(jí)擴(kuò)大培養(yǎng)至1000-2000L規(guī)模后，用1mol/L的HCl調(diào)pH至5.0，保溫42℃，2h后，冷卻至室溫，于轉(zhuǎn)筒式高速離心機(jī)內(nèi)離心，收集含有天冬氨酸酶的菌體；
(2)細(xì)胞固定化：取大腸桿菌濕菌體15kg，懸浮于離心后的培養(yǎng)清液80L中或80L生理鹽水，保溫35℃再加入90L保溫35℃的18％明膠溶液和1.0％的戊二醛溶液，充分?jǐn)噭蚝螅胖美鋮s凝固，再放入0.25mol/L戊二醛溶液中浸泡，于5℃過夜后，再切成3–5mm3大小的小塊，并將其浸泡在0.25mol/L戊二醛溶液中5℃過夜，再取出以蒸餾水洗滌，濾干，得含天冬氨酸酶的固定化大腸桿菌，將其裝填到填充式生物反應(yīng)器中，備用；
(3)轉(zhuǎn)化：取保溫32℃的1mol/L延胡索酸銨含1mmol/LMgCl2，pH為8.5底物的溶液，以一定的空間速度連續(xù)流過生物反應(yīng)器，控制最大轉(zhuǎn)化率大于95％，得轉(zhuǎn)化液；
(4)修飾：取1g右旋糖苷溶于15ml蒸餾水，另取一定量NaIO4溶于10ml熱水中，將兩溶液混合，于4℃冰箱反應(yīng)18h，室溫下以蒸餾水透析4h后，再以5LpH7.4的0.1mol/L磷酸鈉緩沖液透析，將透析后的液體加入到步驟(3)的轉(zhuǎn)化液中，混合充分，得到混合液；
(5)制取粗品：向步驟(4)得到的混合液漸加入1mol/L的HCl，調(diào)pH至2.8，在保持5℃下放置過夜結(jié)晶,濾取結(jié)晶,用水洗滌，濾干,于105℃干燥，得L-天冬氨酸粗品；
(6)結(jié)晶：將粗品用稀氨水重結(jié)晶，先以氨水溶解成pH為5.0，濃度15％的溶液再加入1％活性炭，加熱70℃攪拌脫色2h后,趁熱過濾去渣，取濾液冷卻,保溫5℃過夜結(jié)晶,過濾取結(jié)晶,85℃真空干燥，即得L-天冬氨酸成品。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的L-天冬氨酸制取工藝，其特征在于，所述步驟(1)中，所述培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的L-天冬氨酸制取工藝，其特征在于，所述步驟(4)中，所述修飾過程加入交聯(lián)劑。
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