[發明專利]一種鹽生杜氏藻快速培養方法

在審

• 申請號: 201410680313.6
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104480015A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種鹽生杜氏藻快速培養方法，其特征在于具體步驟如下：

步驟1培養液的配制；取一3000毫升的三角燒瓶，裝入煮沸冷卻后的海水2000毫升，加入硝酸銨5克，尿素3克，磷酸二氫鉀1.5克，碳酸氫鈉18克，檸檬酸鐵0.2克，維生素B₁0.02毫克，維生素B₁₂0.1毫克，920植物生長刺激素0.01毫克，EDTA鈉鹽0.01克，保鮮膜封口，放在搖床上搖勻15分鐘，保存備用；

步驟2接種；取一個1000毫升的三角燒瓶，加入步驟1所配好的培養液500毫升，用處于對數生長期、生長旺盛、無污染的鹽生杜氏藻藻種接種，接種后的密度達到2.5×10⁴cell/每毫升，高壓滅菌鍋消毒后的報紙和橡皮筋封口；

步驟3光照培養箱培養；將步驟2接種后的三角燒瓶置入光照培養箱培養，培養的前5天，光照強度設為2500lx，設置溫度為25±1℃，其中光/暗周期12L/12D，即提供間歇光，12小時光照，12小時黑暗；第6、7、8天光照強度設為6000lx，第9天后提供較高的光照和溫度，以脅迫β-胡蘿卜素的積累，光照強度15000lx，溫度30℃。每天用手搖動6次，每次120秒鐘；

步驟4補充營養液；從第6天開始，每天添加步驟1所述營養液50毫升，以補充營養鹽的消耗。然后輕輕搖瓶90秒鐘，放回光照培養箱，繼續培養；

步驟5藻細胞采收；培養至第11天，細胞密度達到125×10⁴cell/每毫升藻液，停止培養，將培養瓶從光照培養箱中取出，關閉培養箱電源。將藻液用離心機離心采收藻細胞，離心機轉速5000轉/每分鐘，離心5分鐘，棄上清液，可得牙膏狀的藻泥，采收完畢。