[發明專利]一種鹽生杜氏藻快速培養方法

在審

• 申請號: 201410680313.6
• 申請日: 2014-11-25
• 公開（公告）號: CN104480015A
• 公開（公告）日: 2015-04-01
• 發明（設計）人: 王培磊
• 申請（專利權）人: 臨沂大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12;C12R1/89
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于水產養殖領域，尤其涉及一種鹽生杜氏藻快速培養方法。

背景技術

鹽生杜氏藻Dunaliella?salina是一種生長在內陸鹽湖的雙鞭毛單細胞綠藻，經馴化后可在普通海水中生活。隸屬綠藻門、綠藻綱、團藻目、鹽藻科、鹽藻屬。細胞卵圓形、橢圓形或梨形，長18-28μm，寬9.5-14μm，在不同鹽度、光照、溫度下形態變化較大。細胞前端呈凹陷狀，在凹陷處生出兩條等長鞭毛，鞭毛比細胞長約1/3；鞭毛基部有一紅色眼點。體內有一杯狀色素體，主要是葉綠素和類胡蘿卜素(以β-胡蘿卜素為主)。無性繁殖，藻體在運動中縱裂為二，各形成一個新體。細胞含豐富油脂、β-胡蘿卜素、蛋白質、多糖、較高的Ca、P、Zn等，還含包括人類必需氨基酸在內的18種氨基酸，累積的甘油為干重的40-50％。在適當的條件下，細胞內合成的β-胡蘿卜素可達細胞干重的14％上。在食品、醫藥保健以及化工和養殖業中具有獨特經濟價值，在澳大利亞、美國和以色列已實現了工業化生產，主要是用作β-胡蘿卜素類保健品、化妝品、營養補充劑和藻粉等。

傳統上，鹽生杜氏藻采用開放式跑道水泥池并使用f/2培養液配方培養，生長慢，易污染，產量低，β-胡蘿卜素含量低、品質差，效益低。為了克服鹽生杜氏藻傳統培養方法缺點，本發明采用光照培養箱培養并在培養液中添加了硝酸銨，尿素，磷酸二氫鉀，碳酸氫鈉，檸檬酸鐵，維生素B₁，維生素B₁₂，920植物生長刺激素等營養成分，在培養的后期補充營養鹽并提高光照強度和溫度，促進藻細胞持續生長并脅迫β-胡蘿卜素積累，培養液營養全面、持久，生長快，產量高，不易污染，品質好，操作簡便，技術性要求不高，投資少，效益高。

發明內容

為了克服目前技術的不足，本發明提供了一種鹽生杜氏藻快速培養方法，具體方法如下：

步驟1培養液的配制；取一3000毫升的三角燒瓶，裝入煮沸冷卻后的海水2000毫升，加入硝酸銨5克，尿素3克，磷酸二氫鉀1.5克，碳酸氫鈉18克，檸檬酸鐵0.2克，維生素B₁?0.02毫克，維生素B₁₂?0.1毫克，920植物生長刺激素0.01毫克，EDTA鈉鹽0.01克，保鮮膜封口，放在搖床上搖勻15分鐘，保存備用。

步驟2接種；取一1000毫升的三角燒瓶，加入步驟1所配好的培養液500毫升，用處于對數生長期藻、生長旺盛、無污染的鹽生杜氏藻藻種接種，接種后的密度達到2.5×10⁴cell/每毫升，高壓滅菌鍋消毒后的報紙和橡皮筋封口。

步驟3光照培養箱培養；將步驟2接種后的三角燒瓶置入光照培養箱培養，培養的前5天，光照強度設為2500lx，設置溫度為25±1℃，其中光/暗周期12L/12D，即提供間歇光，12小時光照，12小時黑暗；第6、7、8天光照強度設為6000lx，第9天后提供較高的光照和溫度，以脅迫β-胡蘿卜素的積累，光照強度15000lx，溫度30℃。每天用手搖動6次，每次120秒鐘。

步驟4補充營養液；從第6天開始，每天添加步驟1所述營養液50毫升，以補充營養鹽的消耗。然后輕輕搖瓶90秒鐘，放回光照培養箱，繼續培養。

步驟5藻細胞采收；培養至第11天，細胞密度達到125×10⁴cell/每毫升藻液，停止培養，將培養瓶從光照培養箱中取出，關閉培養箱電源。將藻液用離心機離心采收藻細胞，離心機轉速5000轉/每分鐘，離心5分鐘，棄上清液，可得牙膏狀的藻泥，采收完畢。

有益結果

傳統上，鹽生杜氏藻采用開放式跑道水泥池并使用f/2培養液配方培養，生長慢，易污染，產量低，β-胡蘿卜素含量低、品質差，效益低。為了克服鹽生杜氏藻傳統培養方法缺點，現在我采用光照培養箱培養并在培養液中添加了硝酸銨，尿素，磷酸二氫鉀，碳酸氫鈉，檸檬酸鐵，維生素B₁，維生素B₁₂，920植物生長刺激素等營養成分，在培養的后期補充營養鹽并提高光照強度和溫度，促進藻細胞持續生長并脅迫β-胡蘿卜素積累，培養液營養全面、持久，生長快，產量高，不易污染，品質好，操作簡便，技術性要求不高，投資少，效益高。

附圖說明

圖1為鹽生杜氏藻形態結構圖；

其中附圖標識為1紅色眼點，2蛋白核，3色素體，4鞭毛；

圖2為鹽生杜氏藻生長情況圖；

圖2，其中橫坐標為培養時間(天)，縱坐標為細胞密度，單位是×10⁴cell/每毫升藻液。

具體實施方式