[發明專利]一種大腸菌群的快速檢測試劑盒及其應用無效
| 申請號： | 201410679235.8 | 申請日： | 2014-11-24 |
| 公開（公告）號： | CN104450896A | 公開（公告）日： | 2015-03-25 |
| 發明（設計）人： | 張輝;陳曦 | 申請（專利權）人： | 武漢明曼基因工程有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/68 | 分類號： | C12Q1/68;C12Q1/10;C12R1/19 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖高新技術開發*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 大腸菌 快速 檢測 試劑盒 及其 應用 | ||
1.一種可視化大腸菌群環介導等溫擴增(LAMP)檢測試劑盒，其特征在于，由反應預混液、熒光顯色劑、內蓋附有滅菌濾紙片的檢測管組成，其中的反應預混液包括Bst?DNA聚合酶、反應緩沖液、dNTP、硫酸鎂、特異性引物組、甜菜堿和無菌雙蒸水；
所述特異性引物組包括外引物F3和B3，內引物FIP和BIP，其核苷酸序列如下：
F3：5’-AGCTGGTCTGAGAGGATGAC-3’
B3：5’-CGGGTAACGTCAATGAGCAA-3’
FIP：5’-GCGCCCATTGTGCAATATTCCCTTTTCCACACTGGAACTGAGACAC-3’
BIP：5’-AAGCCTGATGCAGCCATGCCTTTTTTCCTCCCCGCTGAAAGT-3’。
2.所述試劑盒的應用，其特征在于，通過對樣品簡單的處理便可快速檢測樣品中的大腸菌群是否合格；使用方法包括待檢樣品中細菌DNA的提取、環介導等溫擴增和顯色結果判定：
1）、待檢樣品中細菌DNA的提取：
采用DNA快速提取法，即將樣品稀釋液煮沸，上清液作為環介導等溫擴增反應的DNA模板；
2）、LAMP擴增：
采用25μl反應體系：內引物FIP和BIP各1.6μM，外引物F3和B3各0.2μM，dNTP?1mM，甜菜堿0.5M，硫酸鎂6mM，Bst?DNA聚合酶8U，模板DNA?5μl，10×ThermoPol?Reaction?Buffer?2.5μl，選擇64℃避光反應60分鐘；
3）、檢測結果判定：
將檢測管倒置甩動，使反應液與內蓋上的濾紙片充分混勻，室溫放置2分鐘；正置后用力甩動檢測管，使管內混有熒光顯色劑的反應液聚于檢測管底部，在比色卡背景下觀察反應液顏色：黃綠色則說明樣品中的大腸菌群不合格，棕色則說明樣品中的大腸菌群合格。
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